معلومة

لماذا لا يجب تنظيف شرائح المجهر بمنشفة ورقية؟

لماذا لا يجب تنظيف شرائح المجهر بمنشفة ورقية؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

لقد اشتريت مؤخرًا مجهرًا وقمت بفحص الكثير من البكتيريا وما شابه ، وسرعان ما نفدت الشرائح النظيفة. لقد شاهدت مقاطع فيديو ومقالات توضح كيف لا يجب تنظيف شرائح المجهر بمنشفة ورقية واستخدام منظف بالموجات فوق الصوتية بدلاً من ذلك. لا يمكنني الوصول إلى منظف بالموجات فوق الصوتية ، لذلك أتساءل ما الخطأ في تنظيفها بمنشفة ورقية؟

وأيضًا إذا كان أي شخص يعرف أي حلول سائلة جيدة لتنظيف الشرائح ، فستكون هذه المعلومات محل تقدير كبير.


السبب الرئيسي لتجنب المناشف الورقية والأنسجة وما إلى ذلك هو أنها تتساقط من الوبر (ألياف ورقية) والتي ستترك على الشريحة الخاصة بك وتتداخل في النهاية مع الإعداد الخاص بك. تبدو صغيرة بالعين المجردة ، لكنها ليست صغيرة مقارنة بالإعداد على الشريحة الخاصة بك.

المشكلة الأخرى مع المناشف الورقية وما إلى ذلك هي أنه قد يكون هناك بعض الجسيمات في الورق التي يصعب خدش الزجاج أو الطلاء البصري. هذه مشكلة بالنسبة للبصريات - خاصة تلك المطلية - أكثر من الشرائح المجهرية الرخيصة ، لكنها شيء يجب مراعاته.

إذا كنت لا تقوم بتركيب أجهزة الإعدادية الدائمة ، فمن المحتمل أن يكون التنظيف بالموجات فوق الصوتية أمرًا مبالغًا فيه - على الرغم من أن لدي فائضًا في جهاز الصوت ويقوم بعمل رائع في الكثير من المهام. يكفي عمومًا شطف الشريحة بالماء المقطر أو منزوع الأيونات ثم المتابعة بالكحول (النظيف). سيقول المتشددون البصريون أن الميثانول من الدرجة الطيفية ، ولكن للاستخدام المنزلي ، من المحتمل أن تفعل أي MeOH أو EtOH أو iPrOH نقية بشكل معقول. الشاغل الرئيسي ، مرة أخرى ، هو ترك الجسيمات أو المخلفات. يمكنك ترك الشرائح تجف في الهواء إذا كنت تستخدم كحولًا نقيًا ، أو استخدم قطعة من مناديل العدسة (منديل ورقي خالٍ من النسالة) لمساعدتها على التجفيف بشكل أسرع. لقد استخدمت أيضًا Kimwipes في السؤال ، لكنها ليست خالية من الوبر حقًا ، لذا فهي ليست مثالية. لا تزال أفضل بكثير من المناديل أو المناديل الورقية.


في علم الأحياء ، يعتبر المجهر الضوئي المركب أداة مفيدة لدراسة العينات الصغيرة غير المرئية بالعين المجردة. يستخدم المجهر الضوء الساطع للإضاءة من خلال العينة ويوفر صورة مقلوبة بتكبير ودقة عالية. هناك نوعان من العدسات التي تكبر صورة العينة - وندش العدسة الشيئية على الأنف و عدسة العين (أو عينية). لتحديد ال التكبير الكلي من العينة ، يجب عليك مضاعفة تكبير العدسة الشيئية بتكبير العدسة العينية.

غالبًا ما يستخدم العلماء والفنيون المجاهر الضوئية لدراسة الخلايا. خلايا بدائية النواة هي بسيطة للغاية وتفتقر إلى نواة أو غشاء ملزمة العضيات وهي صغيرة الحجم. من ناحية أخرى، الخلايا حقيقية النواة أكثر تعقيدًا من حيث احتوائها على نواة والعديد من العضيات المتخصصة. تحدد بنية الخلية و rsquos وظيفتها ، وبالتالي فإن كل خلية حقيقية النواة تبدو مختلفة تمامًا عن الأخرى. هذا هو السبب في أن الخلية القلبية تبدو مختلفة تمامًا عن الخلايا العصبية (خلية دماغية).

من المهم جدًا معرفة كيفية التعامل مع المجهر واستخدامه بشكل صحيح. راجع القواعد والنصائح التالية لاستخدام المجهر الخاص بك والتعامل معه.

الشكل 1. أجزاء مسماة من المجهر.

قواعد عامة

  • قم دائمًا بالبدء والنهاية باستخدام العدسة منخفضة الطاقة عند وضع أو إزالة الشريحة.
  • لا تقم أبدًا بإدارة قطعة الأنف بالعدسة الشيئية.
  • لا تبلل أي جزء من المجهر - خاصة العدسات المسرحية والشيئية.
  • استخدم فقط ورق العدسة لتنظيف العدسات المجهرية.

تنظيف المجهر

إذا لزم الأمر ، احصل على مربع صغير من ورق العدسة (وورق العدسة فقط) وامسح برفق عدسات المجهر مباشرة بالترتيب التالي:

  1. السطح السفلي لجميع العدسات الموضوعية
  2. عدسة العين
  3. عدسة المكثف ومبيت الضوء

غسل الشرائح العلامة التجارية الجديدة

ضع قطرة صغيرة من محلول التنظيف على كل شريحة مجهر. يمكن أن يكون هذا سائل غسيل الأطباق ، أو يمكن أن يكون محلول تنظيف أكثر تخصصًا للشرائح ، مثل محلول الكحول الإيثيلي.

ضع الصابون بشكل موحد على جانبي الزجاج بشيء لا يخدش الشريحة ، مثل منشفة خالية من النسالة.

اشطف الشريحة جيدًا باستخدام الماء الدافئ الجاري. استمر حتى يختفي كل سائل التنظيف ، بما في ذلك أي فقاعات إضافية تظهر.

امسح الشريحة بمنشفة ورقية حتى تجف. بدلاً من ذلك ، يمكنك تجفيف الشرائح باستخدام مناشف من الألياف الدقيقة. تأكد من أن المنشفة التي تستخدمها نظيفة لكل شريحة جديدة. قد تضطر إلى التبديل إلى منشفة جديدة بعد عدد معين من الشرائح.

ضع كل شريحة منتهية مرة أخرى في علبة الشرائح. ستحمل كل حالة عادةً 25 شريحة. تأكد من أن كل شريحة تذهب إلى مكانها الصحيح. إذا حاولت التحميل الزائد على العلبة بمزيد من الشرائح أكثر مما يمكن أن تستوعبه ، فقد تصطدم الشرائح ببعضها البعض وتتشقق.


تحضير شرائح المجهر

يتم تثبيت الأجسام المكبرة تحت المجاهر المركبة عليها شرائح المجهر. الشرائح مصنوعة من الزجاج أو البلاستيك ، ويبلغ سمكها حوالي 1 × 3 بوصات ويتراوح سمكها بين 1 مم -1.2 مم.

تسمح طرق التحضير المتعددة بالمشاهدة المتقدمة للأشياء غير العضوية والعضوية.

الأنماط المسطحة والمقعرة

إن أبسط شرائح المجهر هو قطعة مستطيلة الشكل من زجاج جير الصودا أو زجاج بوروسيليكات أو بلاستيك ، مع حواف أرضية.

جميع الزوايا حادة بزاوية 90 درجة ، ويمكن أن تتسبب ، جنبًا إلى جنب مع الحافة الخارجية الخشنة ، في حدوث جروح طفيفة في الأصابع إذا لم يتم التعامل معها بحذر.

يمكن تجميد الحواف العلوية و / أو السفلية للشريحة ، مما يتيح سهولة وضع العلامات لتحديد العينة و / أو الاتجاه. يحافظ الصقيع المحفور على جميع علامات القلم بأمان بعيدًا عن العينة وتوفر مجموعة مختارة من الألوان المتجمدة وسائل إضافية للتصنيف.

زوايا أمان مستديرة لمنع الجروح العرضية بالإضافة إلى الحواف المائلة ذات الزوايا المقطوعة المثالية لعينات الدم هي خيارات متاحة لكل من الشرائح العامة والشرائح المصقولة.

تحتوي الشرائح المجهرية المقعرة على واحد أو أكثر من المنخفضات السطحية المثالية للحلول السائلة والعينات الأكبر. يمكن استخدام شرائح المجهر الأكثر تكلفة هذه بدون غطاء.

تنتج بعض الشركات المصنعة غرفًا بلاستيكية بعدد محدد مسبقًا من الشرائح ذات الأغطية.

يتم عرض الآبار أو القوارير المملوءة بسرعة دون تحضير أو قص الشرائح الفردية لمرحلة المجهر ، مما يجعل هذا مفيدًا بشكل خاص في دراسات الرواسب ، مثل تحليل البول بالإضافة إلى ذلك ، يمكن وضع بعض تصميمات الدرج في حاضنة أو ثلاجة ، مما يسمح بالدراسة من العينات المستزرعة.

ميزات إضافية

بعض الخلايا والأنسجة لا يمكن أن تلتصق بسطح زجاجي عادي وتتطلب شحنة موجبة أو تعديلات سطحية.

توفر الشرائح المشحونة الكهروستاتيكية الوقت والمال ، وهي خيار شائع للباحثين في علم الأنسجة وعلم الخلايا وعلم الأمراض.

يمكن للأسطح المعالجة بالكواشف البيولوجية أن تجعل منزلقًا مقاومًا للماء ومقاومًا لبعض المواد الكيميائية ويقلل من حالات التلوث المتبادل.

تشمل الاختلافات الإضافية لشرائح المجهر ما يلي:

نظام الشبكة المحفور أو graticule

  • يُمكِّن الباحث من مراقبة مجالات الاهتمام والإبلاغ عنها
  • يساعد في رسم اليد
  • يساعد في التخطيط الجغرافي
  • تقديرات الحجم والنطاق
  • مقارنات جنبًا إلى جنب ، بما في ذلك العينة للتحكم
  • يقلل من خطر انتقال التلوث
  • نادرا ما تستخدم بديلا للزجاج
  • أقل عرضة للغبار والخدش
  • يمنع الوهج

زلات الغطاء

غالبًا ما تكون مصنوعة من زجاج البورسليكات أو السيليكات ، وتحتفظ زلات الغطاء بالعينات في مكانها وتحميها من الحركة غير المقصودة والتلوث.

كما أنه يحمي المجهر ويمنع التلامس المباشر بين العينة والعدسة بالإضافة إلى التسرب العرضي للمستحضرات التي أساسها الماء.

عادةً ما يكون زجاج الغطاء الرفيع والشفاف مربعًا ومتاحًا في النوعين رقم 1 ورقم 2.

مناسبة للفحص المجهري عالي الدقة وتحضيرات الغمر بالزيت ، الأغلفة رقم 1 بسمك 13-17 مم. عدد 2 أغطية ، .17 - .25 مم ، مصممة للأغراض العامة.

تشمل الخصائص الأقل شيوعًا الأشكال المستطيلة والمواد البديلة مثل الكوارتز وأنواع معينة من البلاستيك والخطوط أو الشبكات المحفورة وسمكًا إضافيًا.

إذا لم تقم بإنشاء شريحة دائمة باستخدام الغراء و / أو مانع التسرب ، فيمكن إزالة زلات الغطاء وتعقيمها لإعادة الاستخدام المتعددة.

تقنيات التحضير: الحوامل الجافة ، التثبيت الرطب ، الاسكواش ، التلوين

تتمثل الطرق الرئيسية لوضع العينات على شرائح المجهر في التركيب الرطب والتركيب الجاف والتلطيخ والاسكواش والتلطيخ.

الحامل الجاف هو الأسلوب الأساسي: ببساطة ضع مقطعًا مقطعًا رفيعًا في وسط الشريحة وضع قسيمة غطاء فوق العينة.

تعتبر الحوامل الجافة مثالية لمراقبة الشعر والريش والجسيمات المحمولة في الهواء مثل حبوب اللقاح والغبار وكذلك المواد الميتة مثل أرجل الحشرات والمن أو الهوائيات. تتطلب العينات غير الشفافة شرائح دقيقة جدًا للإضاءة الكافية.

نظرًا لاستخدامها في المواد غير العضوية والميتة بشكل أساسي ، يمكن نظريًا أن تدوم الحوامل الجافة إلى أجل غير مسمى.

تستخدم العينات المائية والكائنات الحية والملاحظات الطبيعية ، وتعلق العينات الرطبة في السوائل مثل الماء والملح والجلسرين وزيت الغمر. يتطلب التركيب الرطب سائلًا وملاقطًا وماصة ومناشف ورقية.

  • ضع قطرة من السائل في وسط الشريحة
  • ضع العينة على سائل باستخدام ملاقط
  • بزاوية ، ضع جانبًا واحدًا من غطاء الانزلاق مقابل الشريحة مع اتصال الحافة الخارجية للقطرة السائلة
  • اخفض الغطاء ببطء ، وتجنب فقاعات الهواء
  • قم بإزالة الماء الزائد بمنشفة ورقية

على الرغم من أنه يمكن استخدام الحوامل الرطبة لإعداد مجموعة كبيرة من شرائح المجهر ، إلا أنها توفر نافذة انتقالية لأن السائل سوف يجف وتموت العينات الحية.

قد تعيش الكائنات الحية مثل البروتوزوا لمدة 30 دقيقة فقط تحت شريحة جبل مبللة ، ويؤدي وضع الفازلين على الحواف الخارجية لغطاء الغطاء إلى إنشاء ختم قد يطيل عمر الشريحة حتى بضعة أيام.

بالإضافة إلى ذلك ، قد يكون البروتوزوان الأكبر مثل البراميسيوم كبيرًا جدًا و / أو يتحرك بسرعة كبيرة تحت التركيب الرطب.

في هذه الظروف ، فإن إضافة قطع أرضية من زجاج الغطاء إلى الماء قبل طبقة الانزلاق سيخلق مساحة إضافية ويمكن إضافة مواد كيميائية أو خيوط من القطن لإبطاء حركة البراميسيوم والأميبا والهدب.

تتطلب شرائح المسحة شريحتين مسطحتين أو أكثر ، وغطاء ، وماصة ، وورق مناديل:

  • ضع عينة سائلة مثل الدم أو الوحل على شريحة
  • باستخدام حافة الشريحة الثانية ، قم بتلطيخ العينة ببطء لإنشاء طبقة رقيقة ومتساوية
  • ضع قسيمة غطاء فوق العينة ، مع الحرص على عدم حبس فقاعات الهواء
  • إزالة السوائل الزائدة

من الناحية المثالية ، يجب أن تجف المسحات بشكل طبيعي في بيئة ذات درجة حرارة معتدلة وثابتة.

تحدد زاوية شريحة التلطيخ طول اللطاخة ، وتؤدي الزاوية الأكثر انحدارًا إلى تكوين مسحة أقصر. بالنسبة للعينات مثل الدم ، ابدأ بتدعيم شريحة التلطيخ في العينة ثم ادفع عبر الشريحة ، وسحب الدم في الاتجاه المعاكس لإنشاء طبقة ناعمة.

يمكن إنشاء شريحة أكثر سمكًا بقطرتين ، ولكن فقط بدم الثدييات حيث تفتقر كريات الدم الحمراء إلى نواة تسمح بتجميع الخلايا في طبقات متعددة.

اقرأ المزيد عن مسحات الدم - العملية والتقنية ، احتمالية وجود القطع الأثرية

مصممة للعينات الناعمة ، تبدأ شرائح الاسكواش بإعداد نسيج عدسة مكان مبلل فوق زجاج الغطاء ، اضغط برفق لأسفل ، واحرص على عدم إتلاف العينة أو كسر زجاج الغطاء ، ثم سحق العينة لإزالة الماء الزائد.

توجد مجموعة متنوعة من الطرق لتلوين شرائح المجهر ، بما في ذلك البقع غير الحيوية أو في المختبر للخلايا غير الحية والبقع الحيوية أو الموجودة في الجسم الحي للأنسجة الحية. يوفر التلوين تباينًا من خلال اللون يكشف التفاصيل الهيكلية التي لم يتم اكتشافها في تحضيرات الشرائح الأخرى.

يمكن إضافة محاليل التلوين مثل اليود والأزرق الميثيلين والبنفسجي الكريستالي إلى الحوامل الرطبة أو الجافة.

  • أضف قطرة من محلول تلطيخ على حافة جانب واحد من غطاء الغطاء
  • ضع حافة المنشفة الورقية على الطرف المقابل
  • السماح بسحب الصبغة عبر العينة

تعتبر البقع مفيدة بشكل خاص في مجالات الأنسجة وعلم الفيروسات وعلم الأمراض ، مما يسمح للباحثين بدراسة وتشخيص الأمراض ، وتحديد البكتيريا الموجبة والسالبة للجرام وكذلك فحص السمات التفصيلية لمجموعة متنوعة من الخلايا.

الشرائح المعدة

مفيدة بشكل خاص للأغراض التعليمية ولأولئك الذين لا يرغبون في القيام بالعملية الشاقة لإنشاء الشرائح ، تتوفر شرائح المجهر المعدة في جميع مجالات العلوم ، بما في ذلك:


لماذا لا يجب تنظيف شرائح المجهر بمنشفة ورقية؟ - مادة الاحياء

غالبًا ما تمثل المجاهر استثمارًا كبيرًا للأموال وهي أدوات بصرية متطورة تتطلب الصيانة الدورية والتنظيف لضمان إنتاج صور عالية التباين مساوية لجودة المكونات البصرية والإلكترونية والميكانيكية. عندما يتم إهماله من خلال التعرض للغبار والوبر وحبوب اللقاح والأوساخ ، أو الفشل في إزالة زيت الغمر في الوقت المناسب ، أو عند إساءة استخدام الأهداف باهظة الثمن ، يمكن أن يتعرض الأداء البصري لانخفاض خطير يزداد بمرور الوقت.

يمكن أن يتراكم المجهر الذي يظل غير مستخدم لفترة طويلة من الزمن الغبار والحطام من الهواء (وهي حالة تتفاقم فقط من خلال ترك الجهاز مكشوفًا) ، مما قد يؤدي إلى تدهور جودة الصورة على الرغم من أن الجهاز قد يكون جديدًا عمليًا. يعد الاستخدام السليم والصيانة الدورية للمكونات الميكانيكية للميكروسكوب مهمين بنفس القدر لمنع ضعف التشغيل وإلحاق الضرر في نهاية المطاف بالسلامة الميكانيكية الكاملة للجهاز. تم تصميم أفضل أغطية الأجهزة لتوفير أقصى حماية من الملوثات المحمولة جواً لأنواع معينة من المجهر ، حيث يتم تكوينها عادةً مع ملحقاتها المشتركة (انظر الشكل 1). حتى عندما يتم تغطيتها بعناية للحماية خلال فترات عدم النشاط ، فإن المجاهر المستخدمة بانتظام عرضة لتراكم الملوثات. يتم إدخال بعضها بشكل لا مفر منه من البيئة والبعض الآخر بواسطة الميكروسكوبرس أنفسهم ، خاصة في المناطق التي تتلامس فيها اليدين والرموش وحتى الرطوبة الناتجة عن التنفس مع الجهاز بمرور الوقت.

تميل العيوب مثل الغبار والوبر والبقع على المكونات البصرية ، وكذلك الخدوش والثقوب والسطور في العدسات والمرشحات والمنشورات والمرايا ولوحة واجهة مستشعر الصورة ، إلى تدهور أداء المجهر الكلي. يُظهر العنصر الأمامي الموضوعي الموضح في الشكل 2 مجموعة متنوعة من التلوث بالجسيمات ، فضلاً عن الخدوش الشديدة التي تؤدي إلى تدهور خطير في أدائه. عندما تكون العناصر البصرية في أو بالقرب من مستويات المجال المتقارن (الصورة) متسخة أو تالفة أو معيبة ، فمن المحتمل أن تظهر القطع الأثرية في تركيز حاد متراكب على صورة العينة. ومن المفارقات ، أنه كلما زادت جودة المكونات البصرية ، مثل المكثف وعدسات التجميع والترحيل ، زاد تداخل هذه الشوائب والمساهمة في الضوضاء البصرية.

بعد تحديد مصدر الضوضاء الضوئية لمكون معين (عن طريق قلب أو تحويل المكونات المشتبه بها بدورها) ، يمكن إزالة الأوساخ من خلال مجموعة متنوعة من الإجراءات التي تمت مناقشتها بالتفصيل في الفقرات اللاحقة. يعد استخدام زيت الغمر أمرًا ضروريًا في تعظيم الأداء البصري للميكروسكوب ، ولكن استخدامه غير السليم أو الفشل في إزالة الزيت فورًا بعد كل استخدام يشكل أخطر ملوث يجب التعامل معه في صيانة الأجهزة. نظرًا لأن زيت الغمر مادة معروفة يتم تطبيقها عن قصد على المجهر لتحسين الأداء البصري ، تتم مناقشة تنظيفها بشكل منفصل عن إزالة الحطام الآخر الذي يتراكم عن غير قصد على مكونات المجهر الميكانيكي أو البصري.

الإزالة الروتينية للجسيمات السائبة

إذا كان المجهر خاملاً وكشف لفترة طويلة من الزمن ، فمن المحتمل حدوث قدر كبير من تراكم الحطام. في بيئة المختبر النموذجية ، يمكن رؤية كمية مذهلة من المواد الجسيمية تتراكم على هدف أو مكون آخر يُترك مكشوفًا على مقعد حتى لفترة قصيرة ، مثل بين عشية وضحاها. نظرًا لأن هذا الحطام غالبًا ما يكون شديد الكشط ، يجب إزالته من إطار المجهر والأجزاء الميكانيكية بعناية ، باستخدام مكنسة كهربائية صغيرة أو عن طريق التربيت بمنشفة ورقية مبللة. يمكن إزالة الأوساخ غير اللاصقة من أسطح العدسات الأقل حساسية عن طريق التنظيف اللطيف بالفرشاة باستخدام فرشاة شعر جمل نظيفة. يوضح الشكل 3 اثنين من أدوات التنظيف الأساسية التي يشيع استخدامها في الفحص المجهري. بدلاً من ذلك ، يمكن استخدام منفاخ الهواء أو منفضة الغاز المضغوط ، ولكن يجب التأكد من عدم إطلاق أي زيت أو رذاذ مماثل من علبة الغاز المضغوط.

ينتج العديد من المصنّعين أسطوانات غاز مضغوطة خالية من الزيت تكون مثالية لغبار الأسطح الزجاجية إذا تم اتباع الاحتياطات المناسبة (انظر الشكل 4). يجب عدم إمالة أو اهتزاز العلب الصغيرة المحمولة الشائعة للغاز المضغوط أثناء الرش لتجنب إطلاق الوقود السائل البارد. على الرغم من صعوبة مقاومة الميل الانعكاسي لنفخ الغبار عن طريق الفم عندما يتم ملاحظته على العدسات ومناطق أخرى من المجهر ، يجب تجنب ذلك. لا ينبغي أبدًا محاولة نفخ الغبار عن أسطح العدسة بنفث قوي لأن القيام بذلك يخاطر برش سطح العدسة بقطرات من اللعاب التي يمكن أن تختلط بالأوساخ لإنتاج ملاط ​​كاشط. يوصى باستخدام بروتوكول تنظيف متعمد ومنهجي لإزالة التلوث بدقة ، ويتم تفصيل التقنيات المناسبة في الأقسام التالية. بينما يُقترح في كثير من الأحيان اتباع جدول الصيانة المنتظم على فترات دورية ، فإن ضرورة التنظيف يتم تحديدها من خلال استخدام الأداة وفعالية التدابير الوقائية المتخذة لتجنب تراكم الحطام. يجب تنظيف المكونات الحساسة فقط عند الضرورة ، حيث أن معظم الخدوش والأضرار الأخرى التي تلحق بالأسطح البصرية تنتج عن محاولات غير صحيحة لتنظيفها.

الاستخدام السليم وإزالة زيت الغمر

إن اتباع الإجراءات المناسبة في استخدام زيت الغمر سيسهل بشكل كبير مهمة إزالة الزيت من مكونات المجهر قبل أن يتسبب في تلفها. من المهم أن ندرك أن الزيوت الغاطسة ليست خاملة فيما يتعلق بمكونات المجهر الضوئي أو الميكانيكي ، وإذا تركت على اتصال مع الجهاز ، فسوف يخترق الزيت في التروس وآليات الانزلاق وفي الشقوق بين عناصر العدسة وهياكل تركيبها ، مع إمكانية التسبب في ضرر لا يمكن إصلاحه. حتى عند استخدامه بشكل صحيح ، يجب إزالة الزيت الغاطس فور استخدامه لمنع تراكمه في المناطق غير المرغوب فيها من المجهر ، وكذلك لتجنب التدهور البصري من بقايا الزيت المجفف على الهدف. قد لا يعمل الزيت الذي تم تخزينه لأكثر من عام أو عامين بصريًا مثل الزيت الطازج ، وغالبًا ما تؤدي الزيادة المحتملة في اللزوجة إلى صعوبة إزالته. وبالتالي ، يجب وضع بطاقة على عبوات الزيت الغاطس بتاريخ الاستلام والتخلص منها عند الضرورة.

يتطلب الاستخدام الكامل للفتحة الرقمية للنظام البصري المجهر عند استخدام أهداف الغمر تقنية تزييت مزدوجة يتم فيها تطبيق زيت الغمر على الأسطح العلوية والسفلية لشريحة العينة.يوفر وضع زيت الغمر في الفجوات بين الهدف والشريحة وبين المكثف والشريحة وسيطًا بصريًا متجانسًا من المكثف ، عبر العينة (في وسط تركيب مناسب) ، وفي الهدف. على الرغم من أن لزوجة زيت الغمر تقلل من أي هجرة فورية إلى مواقع غير مقصودة ، إذا لم يتم إزالتها على الفور وسمح لها بالتراكم ، فإن تأثيرات الجاذبية والقوى الشعرية ستؤدي في النهاية إلى انتقال الزيت إلى أجزاء من آلية المحطة الفرعية وحامل المجهر ، وربما حتى في الهدف. قد لا يكون هذا التراكم مرئيًا بسهولة ، ويمكن أن يمر دون أن يلاحظه أحد حتى تصبح المشاكل الميكانيكية أو البصرية شديدة بما يكفي لتتطلب الخدمة بواسطة مرفق إصلاح مجهر.

يتطلب الاستخدام الصحيح لزيت الغمر وضع قطرة واحدة على سطح العدسة العلوي لمكثف المحطة الفرعية وقطرة واحدة أخرى أعلى شريحة العينة. ثم يتم رفع المكثف فقط إلى النقطة التي تلامس فيها قطرة الزيت السطح السفلي للشريحة ، ويتم وضع العدسة الأمامية الموضوعية في اتصال مع قطرة الزيت أعلى الشريحة. يجب التأكيد على أن تقنية الغمر بالزيت تستخدم فقط مع مكثف مجهز بعدسة علوية من النوع الغاطس ، وبأهداف غمر. من المحتمل أن تؤدي أي محاولة لتحسين أداء الهدف الجاف عن طريق استخدام زيت الغمر إلى تدميره ، حيث يتم تحسين هذه الأهداف بصريًا للاستخدام في الهواء ، وليست محكمة ضد تسرب السوائل إلى أسطوانة العدسة.

بعد دراسة كل عينة ، يجب إزالة زيت الغمر تمامًا ، حتى إذا كان سيتم ملاحظة شرائح إضافية. في حين أنه يبدو من المناسب إضافة قطرات إضافية من الزيت عند التغيير إلى العينة التالية ، فإن هذه الممارسة تؤدي إلى تراكم الزيت الزائد على المجهر ، والذي سيجد طريقه في النهاية إلى المواقع الضارة في تجميع المحطة الفرعية وحتى حامل المجهر. لا يمكن استيعاب سوى قطرة واحدة من الزيت في كل واجهة عينة بصرية دون إنتاج تلوث قد يكون من المستحيل إزالته دون التفكيك المعقد أو صيانة الجهاز في المصنع.

يتم إزالة زيت الغمر بأمان باستخدام أنسجة العدسة فقط ، دون استخدام أي مذيبات. بعد تحريك المرحلة بعيدًا عن الهدف ، وخفض المكثف بعيدًا عن الشريحة ، يمكن إزالة الشريحة من المرحلة ووضعها جانبًا للتنظيف اللاحق. مع معظم المجاهر ، يمكن الوصول بسهولة إلى الهدف الذي يتطلب التنظيف عن طريق تأرجح برج العدسة لوضع الهدف في مقدمة المجهر. يجب استخدام ورق تنظيف العدسات المخصص للاستخدام على البصريات عالية الجودة ، ويجب تخزينه في حاوية مغطاة لمنع التلوث بالجسيمات المحمولة بالهواء. يتم سحب قطعة مطوية من أنسجة العدسة عبر العدسة الأمامية الموضوعية لامتصاص الزيت ، ويتم تكرارها مع منطقة جديدة من النسيج. يجب تكرار هذا المسح اللطيف لسطح العدسة ، مع العديد من الأنسجة كما هو مطلوب ، حتى لا تظهر خطوط زيت على الأنسجة ، ويتم التخلص من كل نسيج على الفور لتجنب إعادة استخدام الأنسجة الملوثة عن غير قصد على الهدف. يمكن إمساك الأنسجة المطوية تحت ضغط خفيف بيدين أثناء المسح ، أو سحبها عبر العدسة مثل مسحة ورقية.

لا ينبغي أبدًا تطبيق الضغط المباشر من الأصابع على سطح العدسة الزجاجية من خلال الورق لتقليل احتمالية خدش العدسة في حالة وجود أي جسيمات على الأنسجة. يجب التأكيد على أن استخدام عدد من أنسجة العدسة الجديدة أمر ضروري لنجاح هذا الإجراء ، والميل الطبيعي لتقليل "الهدر" هو بالتأكيد اقتصاد خاطئ مع الأخذ في الاعتبار التكلفة النسبية لأنسجة العدسة مقارنة باحتمالية إتلاف هدف مكلف . إذا كانت هناك حاجة إلى 20 منديلًا لتنظيف مكون بصري ، فيجب استخدام هذا العدد الكبير والتخلص منه دون تردد.

عندما لا تظهر أي آثار متبقية لزيت الغمر على المناديل الورقية النهائية ، يجب استخدام منديل آخر لمسح العدسة برطوبة من التنفس. كما حذرنا سابقًا ، لا يجوز نفخ العدسة بشفاه مغلقة بلطف ، بل يتنفسها برفق والفم مفتوح حتى لا يتم طرد قطرات اللعاب. إذا أمكن ، يجب وضع الفم تحت مستوى الهدف لتقليل احتمال سقوط القطرات على العدسة. مع تكثف الرطوبة من التنفس كمواد تشحيم ومذيب ، يتم استخدام قطعة جديدة من أنسجة العدسة لمسح سطح العدسة بحركة دائرية. تتمثل إحدى الطرق الفعالة لتحضير ورق العدسة لهذا التنظيف في ثني الزوايا الأربع لقطعة من الأنسجة معًا ، مع ترك مركز الأنسجة المنتفخ. يمكن ثني الزوايا معًا قليلاً لتشكيل جذع للتعامل مع الأنسجة. عندما يتم الإمساك بالنسيج بواسطة هذا الجذع ، ويتم المسح بمركز الأنسجة المنتفخ ، فإن القوة التي يمكن تطبيقها على الهدف تكون محدودة بنبض النسيج. يمكن تطبيق حركة المسح الدائرية بهذه الطريقة ، مع القليل من القوة المباشرة على سطح العدسة.

يجب تكرار إجراء التنفس على العدسة الأمامية الموضوعية ومسحها عدة مرات بمنديل جديد في كل مرة. مع أهداف التكبير العالية ، وجود عناصر عدسة أمامية صغيرة جدًا ، يمكن لف ورق العدسة إلى نقطة أكثر حدة إذا لزم الأمر ، مع الحرص على عدم لمس جزء النسيج المطبق على العدسة. لا يزال من الممكن استغلال التأثير الزنبركي للورق للحد من القوة التي يمكن تطبيقها على سطح العدسة عند التنظيف. تفترض إزالة زيت الغمر دون إزالة الهدف من المجهر أن هيكل الجهاز لا يقيد الوصول إلى الأهداف. في الحالة الأخيرة ، يجب إزالة الهدف بعناية من الأنف ووضعه على سطح محمي مناسب على طاولة المختبر للتنظيف. في أي حال ، يجب إزالة الأهداف التي يتم استخدامها بانتظام (واحدًا تلو الآخر) لتنظيف شامل على فترات دورية. يسمح ذلك بفحص كل منها بعناية أكبر ، كما هو موضح في القسم التالي ، بحثًا عن علامات أي نوع من التلوث المتراكم. يوضح الشكل 5 تنظيف وفحص الهدف الذي تمت إزالته من المجهر. يمكن تنظيف العنصر الأمامي الصغير للهدف بشكل فعال باستخدام نسيج مكون في نقطة (الشكل 5 (أ)) ، وتقييم فعالية التنظيف تحت التكبير باستخدام العدسة أو العين المقلوبة (الشكل 5 (ب)).

من الناحية المثالية ، لا تتم إزالة الزيت الغاطس من الهدف بنجاح إلا من خلال التطبيق الميكانيكي لأنسجة العدسة ، ثم يتم تطبيق إجراء مماثل على العدسة العلوية للمكثف. قد يكون من المفيد إزالة العدسة العلوية للمكثف لتسهيل التنظيف ، خاصة إذا كانت إزالتها تقلل من احتمالية تشتيت الزيت في أجزاء أخرى من جسم المكثف. يجب تكرار الإجراء الموصوف لتنظيف مقدمة الهدف مع عدسة المكثف التي تم تزييتها ، وفحص جسم المكثف بحثًا عن أي زيت شارد يجب إزالته. بعد تنظيف البصريات ، يجب تنظيف سطوح شريحة العينة بالزيت الغاطس باستخدام مناديل معملية (الأسماء التجارية مثل Kimwipes أو Micro-Wipes). ليس من الضروري استخدام أنسجة العدسة لإزالة الزيت من مناطق أكبر مثل شرائح العينة ، أو من أجزاء أخرى من قاعدة المجهر أو الحامل. يجب فحص جميع هذه المناطق الموجودة على الجهاز بشكل روتيني بحثًا عن أي آثار لزيت الغمر ، والتي إذا وجدت ، يمكن إزالتها بمناشف المختبر أو قطعة قماش قطنية ناعمة.

تمثل المجاهر المقلوبة (زراعة الأنسجة) مشاكل خاصة فيما يتعلق باستخدام أهداف الغمر بالزيت لأن الزيت المنسكب أو المهاجر يمكن أن يتسلل بسهولة إلى الجزء الداخلي من الهدف عند التقاطع بين الجسم وسبطانة العدسة الأمامية المتداخلية المثبتة على الزنبرك. إذا سمح للزيت بالتراكم ، فمن الممكن تصور أن يتدفق ، تحت قوة الجاذبية ، حتى في البرج الموضوعي أو الأنف. تتوفر زيوت الغمر عالية اللزوجة المصممة خصيصًا للاستخدام مع المجاهر المقلوبة ، ويجب استخدامها لمنع انتقال الزيت من العنصر الأمامي الموضوعي.

مخاطر التنظيف بالمذيبات

توصي العديد من المنشورات من قبل السلطات المحترمة في مجال الفحص المجهري ، بما في ذلك العديد من مصنعي المجاهر ، باستخدام مذيبات مختلفة كأدوات مساعدة في إزالة زيت الغمر من الأهداف والبصريات الأخرى ، وكذلك للإزالة الروتينية للملوثات الأخرى. في حين أن هذا قد يبسط ويسرع عملية التنظيف ، فإن الاختلافات في تكوين العدسات والمواد المستخدمة في مكونات المجهر الأخرى ، بالإضافة إلى مخاطر الصحة والسلامة المقدمة في استخدام معظم المذيبات القابلة للتطبيق ، تجعل من غير المستحسن التوصية باستخدامها العام. يجب توخي الحذر الشديد عند استخدام المذيبات على المكونات التي قد تتضرر بشكل لا يمكن إصلاحه إذا انتقل المذيب إلى المناطق الداخلية أو إذا تم استخدامه بشكل زائد وظل ملامسًا للسطح لفترة طويلة قبل التبخر. العديد من إجراءات التنظيف التي تم استخدامها بنجاح لعقود من الزمن أصبحت غير مقبولة اليوم لعدة أسباب ، بما في ذلك المعرفة الإضافية بمخاطر الصحة والسلامة المرتبطة بمذيبات المركبات العضوية غير القطبية المستخدمة في زيوت الغمر. إن مسألة استخدام المذيبات معقدة ، وتشوبها التوصيات المتناقضة في الأدبيات العلمية ، وكذلك الاختلافات في المنشورات الفنية للمصنعين. تتم مناقشة بعض الاعتبارات ذات الصلة بتنظيف المذيبات بمزيد من التفصيل في الأقسام التالية.

في الماضي ، تم استخدام المذيبات بشكل روتيني في أي مهمة تنظيف تقريبًا في الفحص المجهري ، وخاصة لإزالة زيت الغمر. المشاكل المحتملة المرتبطة بتنظيف المذيبات خطيرة بما فيه الكفاية بحيث أن أفضل نهج حالي في تنظيف المجهر هو استخدام المذيبات فقط عند الضرورة القصوى ، بشكل أساسي كملاذ أخير بدلاً من الخطوة الأولى. توضح المعلومات الواردة في كتيبات التعليمات الخاصة بمصنعي المجهر صعوبة اختيار مذيب للتنظيف عند الحاجة إليه. حذرت بعض الشركات المصنعة لسنوات على وجه التحديد من استخدام الكحول كمذيب لتنظيف العدسات ، بينما أوصى البعض الآخر بالإيثانول وخلائط الإيثانول مع المذيبات الأخرى. يمكن أن يكون المذيب المثالي قابلًا للامتزاج مع المركبات العضوية غير القطبية ، وغير قابل للاشتعال بدرجة عالية ، ومتطاير بدرجة كافية ليتبخر بسرعة دون ترك أي بقايا ، ويكون غير مسترطب وغير سام. معظم المذيبات التي تم استخدامها بشكل روتيني تاريخيًا تفشل في واحد أو أكثر من هذه المعايير. مع البصريات التي تسمح باستخدام الكحول ، يكون خليط الإيثر والإيثانول (50:50 من حيث الحجم) فعالاً ، كما هو الحال مع الخليط المعدل من الأثير والإيثانول والكلوروفورم (48: 48: 4 من حيث الحجم) ، لكن كلاهما قابل للاشتعال بشكل خطير أو مادة متفجرة وتنتج أبخرة سامة.

من أهم المخاطر مع العديد من المذيبات التي أثبتت فعاليتها في تنظيف البصريات المجهرية أنها تتمتع بإمكانية إذابة الأسمنت المستخدم في تجميع العدسات (كما تفعل زيوت الغمر نفسها إذا سمح لها بالبقاء على البصريات). في الماضي ، كان يُنظر إلى البنزين على أنه مذيب عالي الفعالية لتنظيف العدسات ، ولكنه يتطلب دائمًا الحذر الشديد للحد من ملامسة العدسة لمدة لا تزيد عن ثانية أو ثانيتين ، نظرًا لارتفاع قابلية الذوبان في البنزين من البلسم وبعض أنواع الأسمنت الأخرى المستخدمة في تركيب العدسة (ولتركيب الأغطية على شرائح العينة). تعتبر التقلبات العالية للبنزين ميزة في هذا الصدد ، ولكن المادة أيضًا شديدة الاشتعال وسامة. من المعروف الآن أن الجلد يمتص البنزين بسهولة ، وهذا بالإضافة إلى استنشاق الأبخرة يمكن أن يتسبب في تلف الكبد. نتيجة للمخاطر العديدة ، لا ينبغي أبدًا استخدام البنزين في التنظيف. تم استخدام الزيلين على نطاق واسع لسنوات ، ويعتبر مذيبًا أقل عدوانية من البنزين ، ولكن بسبب معدل التبخر المنخفض ، قد يكون السائل المتبقي أكثر عرضة لاختراق العدسة وإتلافها ما لم يتم استخدام الزيلين بشكل مقتصد للغاية. ومع ذلك ، فإن الزيلين شديد الاشتعال وسام ومسرطن وقد يسبب حساسية ملامسة للجلد. على الرغم من أن الكحول والزيلين يوصى بهما على نطاق واسع كمذيبات لتنظيف العدسات ، إلا أنهما يُسميان أيضًا على أنهما ضاران بالمكونات الميكانيكية والبصرية للعديد من المجاهر. يمكن أن يتضرر التشطيب على أجزاء من حامل المجهر والمواد المستخدمة في عدد من الأجزاء نفسها بشدة بسبب التعرض لأي من المادتين.

نظرًا للاختلاف في توصيات المذيبات ، واحتمال عدم معرفة المستخدم لبعض المواد المستخدمة في مكونات الأداة ، فمن الحكمة تقييد استخدام أي مذيب إلى الحد الأدنى المطلق. لا ينبغي غمر المكونات البصرية في أي مذيب ، ويجب فقط ترطيب أنسجة التنظيف ، وعدم تشبعها أبدًا ، بمحلول تنظيف. توجد فجوات دقيقة بشكل شائع عند التقاطعات الزجاجية المعدنية لعنصر أمامي موضوعي ، مما يسمح بإمكانية انتقال المذيب إلى داخل المكون البصري إذا تم استخدام مذيب مفرط. اعتمادًا على تركيبته ، فإن الأسمنت البصري المستخدم لربط تركيبات عناصر العدسة في الأهداف قابل للذوبان بشكل شائع في واحد أو أكثر من المذيبات ، والكحول ، والزيلين ، والأسيتون. يتم توضيح نتيجة تغلغل المذيب بين عناصر العدسة في الشكل 6 ، حيث حدث الفصل الجزئي لمجموعات العدسات الأسمنتية. على الرغم من أن معظم الأسمنتات الضوئية الحديثة لا تتأثر بسهولة بالزيلين ، إلا أن بعض الأهداف القديمة تستخدم الأسمنت القابل للذوبان تمامًا في الزيلين.

مواد التنظيف البديلة

تم العثور على العديد من البدائل للمذيبات الخطرة لتكون فعالة في التنظيف بالمجهر ، ويوصي مختلف المتخصصين في الميكروسكوب والمصنعين بمجموعة متنوعة من عوامل التنظيف ، وكذلك مواد التنظيف (انظر الشكل 7 للحصول على أمثلة). تمت متابعة البدائل الأكثر أمانًا للزيلين على نطاق واسع ، ويرجع ذلك جزئيًا إلى أن هذا المذيب يستخدم بشكل شائع في مختبرات علم أمراض الأنسجة وعلم الخلايا كعامل إزالة التعرق والتطهير. المذيبات المسجلة الملكية هيستولين و هيستوكلير تكتسب شعبية كبديل للزيلين في مختبرات الفحص المجهري ، وقد ثبت أنها فعالة في تنظيف الأدوات أيضًا. تعتمد هذه المذيبات على مركب d-limonene الموجود بشكل طبيعي ، وهو المكون الرئيسي لزيوت قشر الحمضيات والزيوت الأثيرية الأخرى ، والذي تم استخدامه على نطاق واسع في صناعات الأغذية ومستحضرات التجميل لسنوات. على الرغم من أن المذيبات القائمة على الليمونين تتطلب تهوية كافية وحماية للجلد ، إلا أنه يُعتقد حاليًا أنها أكثر أمانًا بشكل عام من الزيلين. الماء المقطر النقي هو أكثر سائل التنظيف أمانًا لأي تلوث قابل للذوبان في الماء إذا كان ذلك غير كافٍ ، سوائل تنظيف عدسات التصوير الفوتوغرافي التجارية فعالة جدًا وآمنة للبصريات الدقيقة عند استخدامها باعتدال. يتكون هذا النوع من عوامل التنظيف بشكل أساسي من الماء الذي يضاف إليه نسبة صغيرة من المادة الخافضة للتوتر السطحي والكحول. يتم استخدام منتجات تنظيف النوافذ التجارية (مثل Windex و Sparkle) من قبل بعض المتخصصين في الميكروسكوب ، دون الإبلاغ عن أي تلف للمكونات البصرية ، ويتم استخدام كحول الأيزوبروبيل بنجاح من قبل الآخرين.

يجب توخي الحذر الشديد عند اختيار المواد لتطبيق الماء أو سوائل التنظيف الأخرى على المكونات البصرية الدقيقة. على الرغم من أن العديد من المنتجات يتم تسويقها على أنها مناسبة لتنظيف العدسات ، وأن المواد الأخرى تعطي انطباعًا شخصيًا بأنها لن تكون ضارة ، إلا أن ملاءمة مواد معينة للبصريات الدقيقة ليست واضحة دائمًا. على سبيل المثال ، تم إثبات أن مناديل المختبر التي يتم تسويقها تحت اسم Kimwipes مناسبة لتنظيف العدسات ، على الرغم من أنها تبدو خشنة للغاية عند لمسها. في المقابل ، تتم معالجة أنسجة الوجه النموذجية لتشعر بالنعومة على الجلد ، ولكنها تحتوي على جسيمات صلبة ضارة بالأسطح البصرية. تتوافر أنسجة العدسات في أصناف ذات ملمس صلب نسبيًا وصلبة السطح ، مع نسيج ليفي محكم ، وأخرى ذات نسيج غير محكم ومرنة للغاية. يُفضل النوع الأكثر ليونة بشكل عام بالنسبة للبصريات الحساسة ، على الرغم من أن هذه الأنسجة تميل إلى ترك بقايا ألياف سائبة بعد التنظيف ، والتي يجب أن تنفجر بالهواء. ينصح بعض المتخصصين في الميكروسكوبريس بتنظيف العدسات المصنوعة من القطن الخالص أو الكتان المغسول حديثًا لتنظيف العدسات ، ولكن مع أي مادة يُعاد استخدامها ، من الضروري عدم بقاء أي بقايا للمنظفات أو الجسيمات بعد الغسيل. ليس هذا فقط مطلبًا تافهًا للوفاء به ، بل من المهم أيضًا التأكد من أنه في حالة استخدام الأقمشة المصنعة مثل المناديل ، فإنها ليست مطوقة أو مخيطة بطريقة أخرى بالبوليستر أو خيوط كاشطة أخرى.

كانت التوصية الشائعة في الماضي لإجراء تنظيف العدسات هي لف أجزاء صغيرة من الصوف القطني حول طرف عود من خشب البرتقال (خشب خالٍ من الزيت) لاستخدامه كمسحة تنظيف. لم يعد هذا مستحسنًا ، نظرًا لحقيقة أن الصوف القطني مثل ذلك الذي يتم بيعه الآن من قبل الصيدليات على شكل لفائف يحتوي عادةً على نسبة من الألياف الاصطناعية ، وليس مناسبًا للأسطح الرقيقة مثل الصوف القطني بنسبة 100 في المائة. لا تزال المسحات القطنية غير المعالجة تعتبر مناسبة ، على الرغم من أنها ملفوفة في براعم ضيقة جدًا في المصنع ، وقبل الاستخدام ، من الحكمة فك بعض القطن الموجود في طرف المسحة باستخدام ملقط نظيف (وليس الأصابع ، مما يؤدي إلى ترسب زيوت الجلد) بحيث يتم تطبيق قوة أقل على السطح الذي يتم تنظيفه. يتم استخدام أدوات التطبيق التي يتم تصنيعها عن طريق ربط قطع صغيرة من الشمواه النظيف بأعواد خشب البرتقال بشكل شائع من قبل فنيي البصريات ، وهي متوفرة تجاريًا أو يمكن تصنيعها بأحجام خاصة ، حسب الرغبة.

التنظيف الأساسي للمكونات الميكانيكية

الشغل الشاغل في صيانة المكونات الميكانيكية للميكروسكوب هو مناطق الجهاز التي تتعرض حتما لزيوت الجلد من اليدين والرطوبة من التنفس ، ومنطقة المرحلة التي تتعرض لمجموعة متنوعة من الملوثات أثناء جلسات التصوير. بالإضافة إلى المرحلة ، تشمل المكونات الأخرى التي يجب تنظيفها أدوات التحكم مثل المقابض والرافعات وقضبان التحكم المتحركة وأنبوب الجسم والحامل. نظرًا لأن العديد من أدوات التحكم في المجهر ، مثل مقابض التركيز ، تكون مضلعة أو مضغوطة في نمط التظليل الدقيق ، فإن زيوت الجلد تميل إلى التجمع في هذه المناطق وتجذب الغبار ، والذي يمكن أن يرتبط بشدة بالتحكم. قد يكون التنظيف مطلوبًا بشكل متكرر على المجاهر المستخدمة بكثرة. يمكن تحضير سائل تنظيف فعال بإضافة ما يقرب من 10٪ كحول ، من حيث الحجم ، إلى منتج تجاري لتنظيف الزجاج والأسطح. يجب استخدام قطعة قماش مبللة بالمنظف لإزالة التلوث من حواف كل عنصر عن طريق المسح في اتجاه الحواف ، أو في اتجاهات متعددة على الأسطح المطحونة. توفر المناديل المبللة المعبأة مسبقًا للمكونات البصرية طريقة بديلة لتطبيق كمية محكومة من سائل التنظيف ، والتي قد تكون فعالة لتنظيف العديد من أسطح المجهر (انظر الشكل 8). يجب تجفيف كل سطح تحكم نظيف بقطعة قماش نظيفة.

نظرًا لأن الميكروسكوب يعمل مع العيون المجاورة للعين ، فإن قرب مناطق الوجه حول العين والأنف من الأسطح الباردة لأنبوب الجسم يؤدي إلى تبخير الرطوبة وزيوت الجلد المتكثفة على هذه الأسطح المجهرية ، مما يؤدي إلى كمية كبيرة من التلوث. بالإضافة إلى ذلك ، يصطدم التنفس بكل من أنبوب الجسم وقطعة الأنف الموضوعية ، مما يساهم بشكل أكبر في جمع الملوثات المحمولة جواً على الأسطح الرطبة الناتجة. يعد استخدام درع انحراف الهواء ، الذي يشار إليه عادةً باسم حاجب التنفس ، على المجهر فعالًا في تقليل مصدر التلوث هذا عن طريق تحويل النفس بعيدًا عن حامل المجهر وفتحة الأنف. يمكن تنظيف أنبوب الجسم والأجزاء الأخرى من حامل الجهاز بقطعة قماش قطنية ناعمة مبللة برفق باستخدام منظف الأسطح المشار إليه سابقًا. من المهم بشكل خاص تنظيف المنطقة المحيطة بآلية ضبط المسافة بين العينين ، والتي تكون عرضة بشكل خاص لتراكم التلوث. من أجل تجنب الحصول على أي رطوبة داخل أنابيب العدسة ، لا ينبغي مسحها بقطعة قماش مبللة بالقرب من الجزء العلوي عند سطح التزاوج حيث تستقر العين. بعد تنظيف أنبوب الجسم ، يجب تجفيفه بقطعة قماش قطنية أخرى ، ويمكن استخدام هذه القماش الجاف لتنظيف الجزء العلوي من أنبوب العدسة والحواف الخارجية للعين مع الحرص على تجنب ملامسة أسطح العدسة الزجاجية. .

يتم تنظيف مرحلة المجهر بطريقة مماثلة لأنبوب الجسم ، أولاً بقطعة قماش مبللة ، ثم بقطعة قماش جافة. نظرًا لتنوع الملوثات التي قد تترسب على المسرح من العينات ومن المعالجة والتلاعب المستمر ، يجب تنظيفها بعد كل استخدام للميكروسكوب. يجب توخي الحذر عند التنظيف حول حافة فتحة المركز في المرحلة ، ويجب عدم الاتصال بالجانب السفلي من المرحلة حيث قد يكون هناك شحم مكشوف من أسطح التحميل. يجب التخلص من أي قطعة قماش ملوثة بالشحم الخاص المستخدم في مرحلة الجهاز لتجنب نقلها إلى أجزاء أخرى من المجهر ، حيث قد يكون من المستحيل إزالتها.

يجب تنظيف ما تبقى من حامل المجهر بعناية بنفس الإجراء الخاص بقطعة قماش قطنية مبللة متبوعة بقطعة قماش جافة ، مع الحرص على تجنب الأسطح البصرية أو أي منطقة قد تتعرض لاختراق الرطوبة التي يمكن أن تلحق الضرر بالآليات الداخلية أو الدوائر الإلكترونية. بعد التنظيف الكامل للمكونات الميكانيكية كما هو موصوف ، والمسح بعناية لأي انسكابات سائلة في المنطقة المجاورة للأداة ، يمكن استخدام مكنسة كهربائية صغيرة (انظر الشكل 3) ، بخرطوم مرن وملحق فرشاة ناعمة ، لشفط أي سائل مادة فضفاضة على الحامل ومنطقة الطاولة حولها. يجب توخي الحذر الشديد لتجنب لمس أي أسطح بصرية بفرشاة التفريغ.

التنظيف الأساسي للمكونات البصرية

يعد وجود بروتوكول منهجي لفحص المكونات البصرية المجهرية وتنظيفها أمرًا ضروريًا لعدة أسباب. البصريات ليست فقط أهم المكونات في تكوين الصورة وتسجيلها ، بل هي الأغلى ثمناً والأكثر حساسية والأكثر عرضة للتلف. يعد فحص الأسطح الضوئية بالتكبير ، الذي يتم توفيره بواسطة العدسة أو العين المقلوبة ، خطوة أولى مهمة في التنظيف. من المهم تقييم ما إذا كان التلوث موجودًا وتحديد نوع المادة لأن التنظيف غير الضروري يؤدي إلى نتائج عكسية ولأن أنواعًا معينة من التلوث ليست واضحة دون فحص دقيق. على وجه الخصوص ، يجب فحص العناصر الأمامية للهدف والمكثف بانتظام باستخدام مكبر تحت الضوء المنعكس عن طريق وضع مصدر الضوء بعناية بزاوية على السطح الذي يتم فحصه بحيث يمكن رؤية أي حطام. عند استكشاف الأخطاء وإصلاحها لصورة مجهر ضبابية أو منخفضة التباين ، يمكن افتراض أن السبب الأرجح هو عنصر موضوعي أمامي متسخ ، أو حطام على الأسطح الزجاجية بالقرب من مستشعر التصوير ، أو ساترة قذرة. الأهداف عالية التكبير ، مع مسافات عمل قصيرة جدًا ، معرضة بشكل خاص للتلوث ، وتتطلب تفتيشًا متكررًا.

ينتج عن وجود حتى الأوساخ البسيطة أو التلطيخ على الهدف ، بغض النظر عن طبيعة المادة ، نفس التأثير ، وهو تقليل حدة الصورة. هذا صحيح بالنسبة للمواد الجسيمية والتلوث بمادة شفافة تمامًا مثل زيت الغمر. تتداخل آثار الزيت ، بما في ذلك بصمات الأصابع الدهنية على عنصر أمامي موضوعي جاف ، مع انتقال أشعة الضوء عبر الهدف بنفس الطريقة التي تتداخل بها العدسة التالفة أو التي بها عيب في التصنيع البصري. يعد فحص عنصر الهدف الأمامي هو أفضل طريقة لتحديد ما إذا كان التلوث موجودًا ، وإذا كان الأمر كذلك ، فما هو الإجراء المطلوب لإزالته.

تنطبق إجراءات التنظيف الموضحة أدناه فقط على الأسطح المكشوفة للمكونات البصرية المختلفة للمجهر. لا ينبغي أبدًا بذل أي محاولة لتنظيف الأسطح البصرية الداخلية لمعظم مكونات المجهر ، ويتم إعطاء التحذيرات في كل قسم من الأقسام التالية المتعلقة بمكونات محددة من أجل التأكيد على الضرر المحتمل الذي يمكن أن يحدث بسبب عدم اتباع هذه النصيحة بدقة. يجب اتباع بروتوكول التنظيف الأساسي للأسطح الضوئية ، والذي يتم اتباعه عمومًا لجميع المكونات الضوئية ، في خطوات ، على النحو التالي:

فحص سطح العدسة - يتم إزالة المكون البصري المراد تقييمه من المجهر ووضعه على منشفة مختبر أو سطح واقي مماثل على طاولة الجهاز. قبل محاولة أي تنظيف ، يجب فحص السطح البصري باستخدام التكبير تحت الضوء المنعكس لتحديد حالة المكون. يجب إيلاء اهتمام خاص لوجود أي مادة جسيمية ، والتي يجب افتراض أنها مواد كاشطة ، وإزالتها قبل إجراء أي تنظيف آخر. بالإضافة إلى ذلك ، يجب ملاحظة وجود أي طبقات أو بقع أو بقع. العدسة المكبرة من 2-3x مناسبة لفحص البصريات الأكبر مثل العين والمكثفات ، بينما تتطلب عناصر العدسة الأصغر حجمًا تكبيرًا تقريبًا 5x إلى 10x لإجراء الفحص المناسب. من الأهمية بمكان إزالة الجسيمات من سطح العدسة كخطوة أولى في التنظيف ، لأن أي جسيم يمكن أن يكون كاشطًا وينتج عنه خدوش إذا تم تحريكه عبر السطح باستخدام أنسجة العدسة الأكثر رقة.

إزالة الجسيمات غير الملتصقة - في حالة ملاحظة أي غبار أو ألياف أو جزيئات أخرى على سطح العدسة ، يجب محاولة إزالتها بأقل طريقة ممكنة ، والتي تتم عن طريق نفخ الهواء برفق عبر (غير متعامد مع) سطح العدسة. الطريقة الأكثر أمانًا لغبار الهواء هي استخدام لمبة أو بالون مطاطي ، مثل تلك المخصصة للاستخدام كمحقن للأذن وحقنة شرجية للرضع (حقنة الأذن موضحة في الشكل 7). تعد حقنة حقنة شرجية أكبر مناسبة للبصريات الأكبر مثل العدسات والمكثفات والمنشورات. السبب في عدم النفخ مباشرة نحو الجسيمات والسطح هو أن هذا يمكن أن يجبر الجزيئات الكاشطة على طلاء العدسة الرقيق ، وربما يجعل إزالتها أكثر صعوبة ، مما يؤدي في النهاية إلى إتلاف السطح في هذه العملية. يمكن أن يؤدي التأثير التراكمي للخدش المتكرر من هذا النوع ، على الرغم من كونه طفيفًا ، إلى تدهور أداء البصريات. يجب توخي الحذر لتجنب ملامسة طرف المحقنة لسطح العدسة. أفضل نصيحة هي تجنب أي استخدام لعلب الهواء المضغوط لتنظيف العدسات. من الصعب مع هؤلاء التحكم في ضغط الهواء الذي يؤثر على السطح الذي يتم تنظيفه ، وهناك دائمًا خطر خروج هواء شديد البرودة أو سائل متجمد على سطح العدسة والتسبب في ضرر لا يمكن إصلاحه. لا يمكن لطلاء العدسة أو الأسمنت البصري بين عناصر العدسة تحمل التجمد الموضعي دون تلف. إذا كان لا بد من استخدام منفضة الهواء المعلب لأي سبب من الأسباب ، فيجب تثبيتها في وضع رأسي لتجنب الإمالة (مما يؤدي إلى طرد السائل البارد) ، وتزويدها بطول من الأنابيب البلاستيكية المرنة للسماح بتوجيه الهواء إلى الداخل الاتجاه المطلوب على السطح البصري. من الأفضل بكثير استخدام منفضة المصباح الهوائية اليدوية للتخلص من هذه المخاطر تمامًا.

إعادة فحص سطح العدسة - سيكشف فحص العدسة مرة أخرى باستخدام المكبر ما إذا كانت جميع الجسيمات قد تمت إزالتها ، وإذا كان الأمر كذلك ، فيجب ملاحظة أي أغشية ملوثة لإزالتها لاحقًا. إذا بقيت الجسيمات بعد غبار الهواء الأولي ، فيجب إجراء محاولة أخرى لإزالتها بالهواء وحده. من المرجح أن يتم ربط أي شيء لا يزال موجودًا في فحص آخر من خلال التوتر البيني المباشر بين الجسيم والسطح ، أو بسبب فيلم متداخل من نوع ما ، ويجب إزالته قبل المضي قدمًا في تنظيف ملوثات الفيلم.

إزالة الجسيمات المرفقة - المواد الجسيمية التي تقاوم الإزالة عن طريق غبار الهواء وحده من المرجح أن يتم احتجازها بواسطة فيلم سطحي من خلال منطقة تلامس دقيقة ، ويمكن إزاحتها عن طريق تطبيق قوة جانبية طفيفة على جانب الجسيم. يتطلب هذا الإجراء ممارسة ، وبالتأكيد يجب إجراؤه باستخدام التكبير المناسب لضمان عدم حدوث أي ضرر للعدسة. لابتكار أداة لدفع الجزيئات المرفقة من مواقعها ، يمكن قطع سيخ الخيزران الرقيق أو المسواك الخشبي إلى نقطة مربعة رفيعة جدًا بشفرة حلاقة. بعد التنفس برفق شديد على العدسة (مع فتح الفم على مصراعيه) لإنتاج رطوبة مكثفة ، والتي ينبغي أن تخفف الجسيمات من فيلمها اللاصق ، يتم وضع نقطة الأداة الخشبية في اتصال مع جانب الجسيم. يتم دفعها جانبًا بلطف ، مع الحرص على عدم لمس سطح العدسة بالأداة. تتكرر هذه العملية لأي جزيئات أخرى متصلة ، ويتم استخدام حقنة الأذن الصغيرة لتنفخ عبر سطح العدسة لإزالة المادة المحررة.

إعادة فحص سطح العدسة - يتم فحص العدسة مرة أخرى باستخدام التكبير لتحديد ما إذا كانت جميع الجسيمات قد تمت إزالتها. في حالة بقاء أي منها ، يتم تكرار إجراء الإزالة ، ويتم فحص العدسة مرة أخرى. عند إزالة جميع الجسيمات ، في حالة عدم وجود تلوث إضافي ، يمكن إعادة تثبيت المكون على المجهر. في حالة وجود أي فيلم أو خط أو بصمات أصابع أو قطرات أو ملوثات أخرى على السطح البصري ، يتم تنفيذ الخطوات التالية.

إزالة الأغشية القابلة للذوبان في الماء - يمكن إزالة المواد القابلة للذوبان في الماء من سطح العدسة باستخدام أنسجة العدسة والرطوبة الناتجة عن التنفس ببطء على العدسة. يجب استخدام الأنسجة بالطريقة الموصوفة سابقًا للحد من القوة المطبقة على العدسة ، وعدم فركها على السطح مباشرة بضغط الإصبع. بالإضافة إلى تقنية النسيج المنتفخ ، هناك عدة طرق أخرى مناسبة للحد من القوة التي تمارسها أنسجة العدسة. أحد الأساليب الفعالة لأسطح العدسات الصغيرة نسبيًا هو لف نسيج العدسة المطوي في أنبوب ضيق ، ثم تمزيقه إلى نصفين لتشكيل أنبوبين أقصر لكل منهما نهاية مهترئة. تُستخدم النهاية البالية لكل أنبوب لتنظيف سطح العدسة. لا يجب أن تؤدي عملية التمزيق إلى إزاحة أي جسيمات على الورق في تلك المنطقة فحسب ، بل تقلل النهاية الممزقة من القوة التي يمكن تطبيقها على العدسة. بعد التنفس برفق وببطء على العدسة مع فتح الفم على مصراعيه لتوفير الرطوبة ، يتم تنظيف العدسة بأنبوب نسيج مهترئ في حركة دائرية تبدأ من مركز العدسة وتعمل للخارج باتجاه المحيط. يتم التخلص من الأنسجة وتكرر العملية بقطع إضافية ممزقة ، حتى تظهر العدسة نظيفة أو لا يلاحظ المزيد من التحسن. قد لا تصبح العدسة نظيفة تمامًا في حالة وجود أي ملوثات غير قابلة للذوبان في الماء.

فحص سطح العدسة - يتم فحص العدسة مرة أخرى باستخدام التكبير ، وإذا كانت نظيفة تمامًا ، فيمكن إعادة المكون للخدمة على الجهاز. إذا بقيت أي رواسب أو بقع شبيهة بالفيلم على العدسة ، فمن المرجح أنها مادة غير قابلة للذوبان في الماء ، والتي يجب إزالتها بخطوة التنظيف الإضافية التالية.

إزالة الأغشية غير القابلة للذوبان في الماء - تتطلب الملوثات الموجودة على سطح بصري والتي لا يتم إزالتها بسهولة بالماء (بخلاف الزيت الغاطس ، الذي تمت مناقشته سابقًا) مكون تنظيف إضافي. من أكثر المواد أمانًا والفعالة على الرواسب من هذا النوع أحد سوائل تنظيف العدسات التجارية للبصريات الدقيقة ، والتي تتكون عادةً من ماء مقطر تُضاف إليه نسب صغيرة من المادة الخافضة للتوتر السطحي والكحول (انظر الأمثلة في الشكل 7) . يجب استخدام كمية محدودة جدًا من السوائل ، ولا ينبغي أبدًا وضعها مباشرة على سطح العدسة. من الوسائل الفعالة للتحكم في كمية السائل المسموح به للتلامس مع العدسة استخدام قطعة قطن توضع عليها قطرة صغيرة جدًا من محلول التنظيف. يجب فحص طرف برعم القطن بحثًا عن أي جزيئات موجودة ، وكما هو موضح سابقًا ، يمكن فك القطن الملفوف بإحكام قليلاً عن طريق سحب طرفه بملاقط نظيفة أو إخراج بعض القطن بإبرة. يمكن تنظيف العدسة عن طريق وضع المسحة برفق في حركة دائرية تبدأ من مركز العدسة وتتحرك للخارج. كبديل لمسحة القطن ، قد يتم لف أنسجة العدسة الرخوة إلى نقطة ، مع الحرص على عدم لمسها في النهاية ، واستخدامها كما تمت مناقشته فيما يتعلق بإزالة زيت الغمر. عند استخدام قطعة قطن بهذه الطريقة ، يجب توخي الحذر الشديد للحد من القوة المطبقة على سطح العدسة ، ويجب عدم استخدام هذه التقنية مطلقًا إلا كخطوة تنظيف نهائية فور الإزالة الكاملة للمواد الجسيمية.

لا تزال هناك طريقة فعالة أخرى لاستخدام سائل تنظيف العدسة بحيث يتم تطبيق قوة قليلة جدًا على عدسة صغيرة ، مثل عنصر أمامي موضوعي ، موضحة في الشكل 9. مع وضع المكون على سطح ناعم على المنضدة ، قطرة واحدة يتم وضع سائل التنظيف على منديل مطوي ، وأثناء دعم النسيج بكلتا اليدين ، يتم وضع القطرة في اتصال مع سطح العدسة. ثم يتم سحب النسيج أفقيًا فوق سطح العدسة ، مما يترك خطًا من السوائل على النسيج. يجب ألا تكون هناك محاولة لإجبار النسيج على ملامسة العدسة في الواقع ، قد يؤدي التوتر السطحي بين العدسة وقطرة السائل إلى سحب الأنسجة قليلاً بعيدًا عن العدسة أثناء تحريكها ، إذا لم يتم ذلك باستخدام قوة كبيرة بحيث تفقد الأنسجة ملامستها لسطح العدسة. يجب تكرار العملية عدة مرات باستخدام قطرة جديدة من السائل ونسيج جديد في كل مرة. بعد التنظيف بالمسحة أو الأنسجة المبللة ، يجب تجفيف سطح العدسة عن طريق التطبيق المتكرر لعدة أنابيب من أنسجة العدسة الممزقة ، مع التخلص من كل منها بعد الاستخدام. يمكن الحصول على مؤشر على نجاح التنظيف عن طريق التنفس ببطء على العدسة لترطيبها ، مع ملاحظة ما إذا كان فيلم الرطوبة متساويًا وبدون انقطاع. كخطوة أخيرة ، تتم إزالة الرطوبة عن طريق المسح بحركة دائرية باستخدام أنبوب نسيج العدسة.

التقييم النهائي لسطح العدسة - يعتبر فحص سطح العدسة بالتكبير هو الخطوة الأخيرة في تحديد ما إذا كان المكون نظيفًا تمامًا قبل استبداله بالمجهر.

ملاحظات وتنبيهات حول تنظيف المكونات المحددة

قد تحتوي الأهداف الحديثة عالية التصحيح على أكثر من 15 عنصرًا فرديًا للعدسة ، بعضها متصل بإسمنت بصري في مجموعات عدسات مركبة ، والتي يتم تجميعها على مسافات فصل دقيقة داخل البرميل الموضوعي. يجب عدم تفكيك الأهداف مطلقًا في محاولة لتنظيف أسطح العدسات الداخلية ، أو لأي سبب آخر. تتمركز عناصر العدسة المكونة بدقة بصريًا ، ويتم تجميعها بدقة لا يمكن تكرارها خارج إعداد المصنع الخاص بالشركة المصنعة ، وأي محاولة للفك ستؤدي بلا شك إلى تلف الهدف. حتى لو كان الوصول إلى الأسطح الداخلية ممكنًا ، فلا يمكن تنظيفها بنجاح دون حدوث تلف ، نظرًا لهشاشة المواد المضادة للانعكاس وأغطية العدسات الأخرى المستخدمة بشكل شائع. تستخدم معظم أسطح العدسات الدقيقة طبقة أو أكثر من طبقات طبقات التداخل التي قد لا يتجاوز سمكها بضع طبقات ذرية. تتم حماية هذه الطلاءات بواسطة طبقات واقية صلبة على أسطح العدسات الخارجية ، لتمكينها من تحمل إجراءات التنظيف العادية ، لكن الطلاءات الموجودة على الأسطح الداخلية تكون أكثر نعومة ويسهل تلفها.

لا ينبغي تحت أي ظرف من الظروف تنظيف عنصر العدسة الموضوعية الخلفي ، بخلاف تفجير الغبار الذي يستقر هناك مع منفاخ حقنة الأذن. نظرًا لتصميم الهدف ، الذي يجعل الوصول إلى العنصر الخلفي أمرًا صعبًا ، فإن محاولات تنظيف العنصر الخلفي تخاطر بإدخال ألياف الأنسجة أو أي تلوث آخر في الجزء الداخلي من التجميع. يمكن التحقق من التلوث من الداخل من خلال النظر من خلال الهدف من الأمام ، مع وجود مصدر ضوء (مثل مصباح مكشوف) بالقرب من العنصر الخلفي. لسوء الحظ ، إذا كان التلوث الداخلي موجودًا ، فلا يمكن إزالته إلا من خلال مراكز الخدمة المؤهلة.

أحد التحذيرات السابقة من أن تكرار الدببة هو أهمية عدم الضغط المفرط على سطح العدسة الأمامية للهدف. العنصر الأمامي لأهداف التكبير الأعلى هو عدسة صغيرة جدًا نصف كروية يتم تثبيتها في مكانها عن طريق الحد الأدنى من التلامس مع مجموعة العدسة. تمنح الكمية الكبيرة من المعدن المحيط بالعنصر الزجاجي الصغير هذه الأهداف مظهرًا قويًا خادعًا ، حيث يمكن بسهولة تحريك العنصر الأمامي بعيدًا عن المحاذاة عن طريق الضغط الزائد ، مما يؤدي إلى تلف الهدف. علاوة على ذلك ، حتى إذا لم يتم إجبار العنصر على الخروج من المحاذاة ، فإن الضغط المفرط أثناء التنظيف أو من خلال التلامس العرضي يمكن أن ينتج عنه فجوات دقيقة عند نقطة التقاطع بين العدسة والبرميل المعدني المحيط ، مما يتسبب في سحب الزيت أو سوائل التنظيف بواسطة القوة الشعرية في الداخل الموضوعي ، تدمير الهدف.

يمكن إزالة العدسة العلوية لمعظم المكثفات ، ويتضمن التنظيف تطبيق إجراء التنظيف البصري الأساسي على الأسطح العلوية والسفلية للعدسة العلوية ، بالإضافة إلى سطح العدسة العلوي للمجموعة الوسطى. يجب عدم تفكيك الأجزاء المكونة لجسم المكثف على الإطلاق. يتم تجميعها بدقة مماثلة للأهداف ، ولا يمكن إعادة تنظيمها خارج منشآت الشركات المصنعة. وينطبق الشيء نفسه على عناصر تباين الطور ومنشورات تباين التداخل التفاضلي ، فضلاً عن أجهزة الاستقطاب التي تشكل مكونات بعض المكثفات. يجب إعادة محاذاة هذه العناصر في المصنع إذا تم إزعاجها ، ويجب عدم إزالتها أو تفكيكها مطلقًا. بسبب موقعه ، يجمع مكثف المحطة الفرعية مجموعة متنوعة من الملوثات ، ويجب تنظيفه بشكل متكرر أكثر من المكونات الأخرى. نظرًا لعدم إمكانية الوصول إلى المكثف نسبيًا في معظم المجاهر ، عادةً ما يتطلب المكثف إزالته للتنظيف المناسب ، ويجب التعامل معه بنفس العناية المقدمة للأهداف.

بعد إزالة المكثف من المجهر ، يمكن عادةً إزالة العنصر العلوي عن طريق فك البراغي. إذا كان حامل المرشح موجودًا أسفل المكثف ، فيجب أن يتم تحريكه بعيدًا عن المكثف وإزالة أي مرشحات للتنظيف اللاحق.قد يكون سطح العنصر العلوي ملوثًا بكل من الجسيمات والترسبات الغشائية ، ويتم تنظيفه باتباع البروتوكول الأساسي لإزالة الجسيمات أولاً ، ثم الأفلام أو اللطخات. عادةً ما يحتوي السطح السفلي لهذه العدسة على بقايا جسيمات فقط ، ولكن يجب فحصها باستخدام مكبر لتأكيد ذلك وتنظيفه وفقًا لذلك. الخطوة التالية هي فحص وتنظيف السطح العلوي للقسم البصري الأوسط للمكثف الذي يتعرض عند إزالة العنصر العلوي.

يجب بعد ذلك قلب المكثف بحيث يمكن فحص وتنظيف السطح السفلي لمجموعة العدسة السفلية إذا لزم الأمر. يتمثل التحذير الأساسي في هذه المرحلة في تجنب إتلاف الحجاب الحاجز للقزحية إذا تم استخدام أحدهما أسفل التركيبة البصرية السفلية للمكثف. في حالة وجوده ، يجب فتح الحجاب الحاجز بالكامل للسماح بالوصول إلى سطح العدسة السفلي ولحماية شفرات الحجاب الحاجز. هذه الشفرات هشة للغاية ولا يجب تنظيفها أو لمسها أو تعريضها لأي سائل. إذا لم يؤدي فتح الحجاب الحاجز إلى سحب الشفرات تمامًا إلى حافة التجميع ، فلا تحاول تنظيف العدسة السفلية بالوصول عبر فتحة القزحية ، حيث من المحتمل حدوث تلف للحجاب الحاجز. يجب تنظيف أي مرشح تمت إزالته مسبقًا بنفس العناية التي يتم إجراؤها مع المكونات البصرية الأخرى. يتم إنشاء مرشحات التداخل باستخدام أغشية رقيقة جدًا مترسبة بالفراغ مماثلة لطلاء العدسة المضادة للانعكاس ، ويتم استخدام المرشحات من هذا النوع بشكل شائع في تجميع المكثف وفي أي مكان آخر في المسار البصري للميكروسكوب. يجب توخي الحذر بشكل خاص عند التعامل مع هذه المرشحات وتنظيفها لمنع تلف الطبقات الرقيقة.

تحتوي القطارات الضوئية للمجاهر الحديثة على عدد من المناشير الدقيقة ومرايا السطح الأمامي ، والتي يوجد معظمها داخل قاعدة المجهر والوقوف. كقاعدة عامة ، لا ينبغي تنظيف أي من هذه المكونات ما لم يكن الوصول إليها ممكنًا دون تفكيك أي جزء من الجهاز. عندما تكون المكونات الداخلية من هذا النوع متسخة ، فإنها تتطلب خدمة المصنع لتنظيفها دون تلف. الاستثناءات الوحيدة هي ثلاثة أسطح موشورية خارجية يمكن الوصول إليها في أنبوب الجسم ، ومرآة مكشوفة (بدون أي تفكيك) في قاعدة بعض المجاهر. تستخدم مرايا السطح الأمامي طلاءًا عاكسًا غير محمي (فضي عادةً) على مقدمة قاعدة زجاجية ، ومن السهل جدًا إتلافها. يمكن إزالة الأتربة والألياف باستخدام غبار هواء لطيف ، يتبعه تنظيف لطيف للغاية بسائل العدسة فقط عند الضرورة القصوى. يجب أن يتم التنظيف باستخدام الأنسجة باستخدام كل جهد للحد من الاحتكاك على سطح المرآة العاكسة ، والتي يسهل تآكلها.

تحتوي أنابيب الجسم ثنائية العينين على مناشير لمسارات ضوء العين اليمنى والعين اليسرى التي يتم محاذاة بدقة باستخدام معدات موازاة خاصة ، ويجب عدم محاولة التفكيك للتنظيف إلا من خلال مرافق خدمة المصنع. نظرًا لأن التجميع الأولي يتم في ظل ظروف الغرفة النظيفة لضمان الحد الأدنى من تلوث الجسيمات ، فمن المحتمل أن تؤدي أي جهود تنظيف داخلية إلى إدخال حطام إضافي فقط. يمكن تنظيف الأسطح المنشورية الخارجية التي تظهر عند إزالة العدسات من أنبوب الجسم بعناية عن طريق نفخ الجسيمات ، متبوعًا باستخدام مسحات قطنية يتم تلطيفها على أطرافها كما هو موضح سابقًا للتنظيف الموضوعي. يجب تفجير الغبار باستخدام حقنة كبيرة للرضع بعد قلب أنبوب الجسم بحيث يتساقط الغبار بعيدًا عن أسطح المنشور ويخرج من أنبوب الجسم. إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من التنظيف لإزالة اللطخات أو الأغشية ، فقد يكون من الضروري توفير الرطوبة لهذا الإجراء عن طريق التنفس على طرف المسحة القطنية بدلاً من المنشور نفسه ، بسبب الموقع الغائر للمنشورات داخل أنبوب الجسم. عندما يتم قلب أنبوب الجسم رأسًا على عقب ، فإن الفتحة السفلية تكشف عن سطح المنشور الثالث أو مسطح بصري يغطيه ، ويجب فحص هذا السطح بحثًا عن علامات التلوث وتنظيفه بعناية إذا لزم الأمر.

تتطلب العدسات تنظيفًا متكررًا نسبيًا لأسطحها البصرية الخارجية ، ولكنها لا تتلوث داخليًا بشكل عام. السطح العلوي لعدسة العين معرض للعديد من أنواع التلوث بسبب قربه من الميكروسكوب واحتمالية جمع الجسيمات المحمولة في الهواء. نظرًا لأنه يتم إزالة العدسات بشكل متكرر لأسباب مختلفة أثناء استخدام الأداة ، يمكن أن يتسخ سطح العدسة في المجال السفلي ويجب أيضًا فحصه بحثًا عن الحطام. يجب تنظيف أسطح العدسة هذه على النحو المطلوب باتباع البروتوكول الأساسي للمكونات البصرية. في الظروف النادرة التي يظهر فيها الغبار أو الألياف داخل العدسة عند فحصها بعد تنظيف العدسة الخارجية ، من الممكن في بعض الحالات إزالة عدسة العين في حاملها وتركيب العدسة الميدانية فيها وتنظيفها داخل الأنبوب والأسطح الداخلية لمكوني العدسة. يجب إعادة تجميعها بعناية فائقة في تكويناتها الأصلية الدقيقة وإلا فلن تعمل العدسة العينية بشكل صحيح. يجب توخي الحذر بشكل خاص مع خلايا العدسة الملولبة بدقة لتجنب تشابك المكونات عند إعادة التجميع. لاحظ مع ذلك ، أنه لا ينبغي تحت أي ظرف من الظروف فتح أو تفكيك عدسة Filar micrometer ، أو عدسة قياس تحتوي على شبكاني داخلي ، أو أي نوع من العدسات ذات القراءة الرقمية لأي سبب من الأسباب. سيؤدي القيام بذلك إلى تدمير المعايرة ، وسيتطلب استعادة المصنع.

قد تتسبب المجاهر المجهزة بكاميرات رقمية في حدوث تدهور في جودة الصورة الملتقطة أو إظهار عيوب الصورة الناتجة عن تراكم التلوث إما على عناصر المرشح التي تُستخدم أحيانًا في محول الكاميرا أو على النافذة الزجاجية البصرية التي قد يتم دمجها لإغلاق الكاميرا الإسكان وحماية مستشعر الصور CCD أو CMOS. من الناحية العملية ، إذا لوحظت بقع داكنة أو قطع أثرية مماثلة في البؤرة في الصور الرقمية ، ولم تكن موجودة في مستوى العينة ، فإن السبب الأكثر ترجيحًا هو تلوث الجسيمات على مستشعر الصورة أو سطح المرشح المرتبط. تتضمن بعض الكاميرات الرقمية مرشحات الأشعة تحت الحمراء القابلة للإزالة في نظام الكاميرا ، بينما في حالات أخرى ، يكون الترشيح المطلوب جزءًا لا يتجزأ من نافذة المستشعر. نظرًا لتنوع التكوينات التي تمت مواجهتها في الكاميرات الرقمية العلمية ، يجب دائمًا اتباع توصيات الشركة المصنعة بشأن التنظيف. بعض الكاميرات ، خاصة تلك التي يتم فيها تبريد المستشعر ، تكون مغلقة بإحكام ، ولا يمكن الوصول إلى المستشعر بشكل مباشر.

بشكل عام ، يجب فحص وتنظيف الأسطح الزجاجية الضوئية على الكاميرات محكمة الغلق ، إذا لزم الأمر ، باتباع طرق التنظيف القياسية لأسطح العدسة ، وإزالة حطام الجسيمات دائمًا قبل تنظيف السطح الزجاجي برفق بالرطوبة من التنفس ، متبوعًا بنسيج العدسة المبلل باستخدام سائل تنظيف العدسة للتلوث غير القابل للذوبان في الماء. إذا كان من الصعب الوصول إلى النافذة باستخدام أنسجة العدسة (مثل أنابيب الأنسجة الممزقة) ، فيمكن استخدام مسحات قطنية بشرط توخي الحذر للحد من الضغط على سطح النافذة. في بعض الكاميرات ، يكون سطح المستشعر مكشوفًا بشكل مباشر داخل جسم الكاميرا ، ومن المرجح جدًا أن يجتذب الغبار والحطام الآخر. قد تكون هناك حاجة إلى تقنيات خاصة في تنظيف المستشعر لتجنب تلف الشحن الاستاتيكي للجهاز ، ويجب استشارة موظفي خدمة الشركة المصنعة للحصول على إرشادات بشأن الإجراءات المناسبة.

نمو الفطريات على الأسطح البصرية

من المشاكل الخطيرة بشكل خاص التي قد تصيب المكونات البصرية المجهرية تطور التلف الفطري. قد يحدث تكوين ونمو مستعمرات فطرية بسرعة في بعض المناخات ، وعند إنشائها على الأسطح الزجاجية ، فمن غير المرجح أن تتم إزالتها قبل حدوث تلف للسطح. لسوء الحظ ، يحدث نمو الفطريات بشكل شائع في الأجزاء الداخلية للمكونات البصرية ، وقد يكون متقدمًا جدًا قبل أن يتم ملاحظته. ذكر مصنع واحد على الأقل لميكروسكوب أن أكثر من 50 في المائة من التدهور في الأداء البصري يُعزى إلى الغيوم الناجم عن أنواع معينة من الفطريات. على الرغم من وجود أكثر من 100000 نوع من الفطريات ، يُعتقد أن عضوين من جنس Aspergillus مسؤولان عن معظم تدهور العدسة. ظروف النمو المثلى لهذه الفطريات هي درجة حرارة عالية نسبيًا ورطوبة عالية ، ولكنها أيضًا أكثر قابلية للتكيف مع مستويات الرطوبة المنخفضة مقارنة بمعظم الفطريات الأخرى. يوضح الشكل 10 كلاً من ظروف النمو المثلى والمقبولة لهذه الفطريات التي تنمو على أسطح العدسات ، مقارنةً بالظروف الأكثر ملاءمة لأنواع الفطريات الشائعة الأخرى. لسوء الحظ ، فإن الظروف الأكثر ملاءمة لتكاثر الفطريات الضارة للعدسة تتطابق بشكل وثيق جدًا مع البيئة الأكثر ملاءمة للإنسان. هذا يعقد بشكل كبير محاولات القضاء أو منع نمو الفطريات على المكونات البصرية.

تقلل الفطريات التي تنمو على أسطح العدسة من أداء العدسة بسبب النفاذية المنخفضة الناتجة عن الضبابية ، وكذلك بسبب تشتت الضوء من الخيوط الشبيهة بالخيوط (الواصلة) للمستعمرات الفطرية. الفطريات التي تنمو على الأسطح الزجاجية لا تلتصق بالجذور ويمكن مسحها ، ولكن للأسف ، تبقى علامات التآكل المتبقية ولا يمكن استعادة أداء العدسة الأصلي. التآكل هو شكل من أشكال الحفر السطحي يحدث عندما يختلط حمض عضوي ينتجه الفطر مع بخار الماء من الهواء الذي يتراكم على خيوط الفطريات. عادة ما يجب استبدال العدسات ذات النمو الفطري الكبير ، لأن الوسيلة الفعالة الوحيدة لتجنب الأضرار الفطرية للمكونات البصرية هي منع نموها في المقام الأول.

تشمل الظروف المواتية للحد من حدوث نمو الفطريات على الأسطح مثل العدسات بيئة منخفضة الرطوبة ودرجات حرارة منخفضة بدرجة كافية وتهوية جيدة وتعرض السطح لأشعة الشمس من حين لآخر. لا يمكن السيطرة على العوامل المناخية بشكل كامل ، واستخدام أنظمة تكييف الهواء ومزيلات الرطوبة في المناخات الدافئة والرطبة مفيد وضروري ، ولكنه لا يلغي نمو أنواع الفطريات عالية المرونة ، والتي يمكن أن تتكيف مع مجموعة واسعة من الظروف ( انظر الشكل 10). يُقترح أحيانًا إستراتيجية تخزين المكونات الضوئية في ظل ظروف جافة ، ولكن هذه ليست ممارسة موصى بها ، لأن مستويات الرطوبة المنخفضة للغاية (0٪ رطوبة) يمكن أن تسرع من تكسير الإسمنت المستخدم للانضمام إلى العناصر البصرية. تحدد المنطقة الجغرافية التي يوجد بها المجهر ، إلى حد كبير ، خطورة نمو الفطريات كعامل في رعاية الأجهزة.

يعرض الشكل 11 ، في شكل مخطط ، التباين الموسمي لظروف نمو الفطريات لعدد من المدن في جميع أنحاء العالم. يمكن الاستدلال من الرسم البياني على أن نمو الفطريات أقل احتمالًا في المناطق ذات الرطوبة المنخفضة باستمرار ، أو في المناطق ذات متوسط ​​درجات الحرارة المنخفضة نسبيًا خلال فترات الرطوبة العالية. في بعض المناخات ، يكاد يكون من المستحيل منع نمو الفطريات إلا إذا أمكن وضع المجهر في بيئة معقمة. ينتج كبار مصنعي المجاهر إصدارات خاصة من بعض المعدات لاستخدامها في البيئات الاستوائية أو غيرها من البيئات المعرضة للفطريات. من بين التدابير الوقائية التي تم تطويرها وضع مادة كيميائية مضادة للفطريات داخل الأهداف ، وعدسات ، وقاعدة المجهر ، وتحسين فعالية السدادات على أي أجزاء متحركة لتقليل دخول الغبار والجراثيم الفطرية من البيئة. المادة الكيميائية عبارة عن مادة صلبة مصممة للتسامي ببطء وإنتاج بخار مضاد للفطريات غير ضار بالمكونات البصرية والميكانيكية للميكروسكوب. يمكن الحفاظ على النشاط المضاد للفطريات على مدى فترات طويلة من الزمن عن طريق تغليف المادة الكيميائية بمادة ذات نفاذية هواء طفيفة فقط ، وبالتالي التحكم الصارم في معدل التسامي.

فوائد الصيانة الوقائية

سيتم تصميم غرفة الفحص المجهري المثالية خصيصًا لهذا الغرض ، وستتضمن كل آلية متاحة للحد من التلوث بالغبار والأبخرة الكيميائية والملوثات الأخرى المحمولة جواً ، فضلاً عن عزل الجهاز عن الاهتزازات الصوتية والميكانيكية وتغيرات درجات الحرارة. نادرًا ما يتم إدراك هذا الوضع المثالي ، وتقع معظم المجاهر في مناطق معرضة لعدد كبير من أوجه القصور البيئية. بعض التلوث لا مفر منه ، بسبب قسوة الاستخدام اليومي ، ولكن على الأقل ، يجب حماية المجهر قدر الإمكان خلال فترات عدم الاستخدام من خلال تغطية الجهاز بأكمله بغطاء مناسب. يقدم مصنعو الأدوات وموردي خدمات ما بعد البيع مجموعة متنوعة من أغطية الغبار المصممة خصيصًا (انظر الأمثلة في الشكل 1). من بين عدة أنواع من الأغطية البلاستيكية ، من المحتمل أن تكون تلك المصنوعة من مادة أكثر نعومة ومرونة أقل عرضة لجذب الغبار. تتوفر أيضًا أغطية قماش خالية من النسالة ، وتوفر حاجزًا فعالًا للغبار يمكن أن يقلل من الحاجة إلى التنظيف.

في حين أن تكلفة المجهر البحثي الحديث يمكن أن تتراوح من بضع عشرات الآلاف إلى عدة مئات الآلاف من الدولارات ، إذا تم استخدامها وصيانتها بشكل صحيح ، يمكن للمكونات البصرية والميكانيكية الأساسية للأداة أن تدوم بسهولة لعدة أجيال من الميكروسكوب. فقط إذا تم استخدام الأداة بشكل صحيح وصيانتها بانتظام ، فهي قادرة على إنتاج أفضل بيانات صورة ممكنة. لا تؤدي تقنيات التشغيل والصيانة غير الصحيحة والخاطئة إلى إنتاج صور غير موثوقة وذات جودة رديئة فحسب ، بل تؤدي إلى معاناة الإنتاجية في المجهر وتقليل العمر المفيد للجهاز بشكل كبير.

توماس جيه فيلرز ومايكل دبليو ديفيدسون - مختبر المجال المغناطيسي الوطني العالي ، 1800 إيست بول ديراك دكتور ، جامعة ولاية فلوريدا ، تالاهاسي ، فلوريدا ، 32310.


إرشادات التثبيت المنزلق

قبل أن تبدأ في بناء الشرائح ، تأكد من أن لديك كل ما تحتاجه ، بما في ذلك الشرائح أو زلات الغطاء أو القطارات أو الماصات وأي مواد كيميائية أو بقع تخطط لاستخدامها.

ستستخدم نوعين رئيسيين من الشرائح ، 1) الشريحة الزجاجية المسطحة الشائعة ، و 2) الشرائح المنخفضة أو شرائح البئر. تحتوي شرائح البئر على بئر صغير ، أو مسافة بادئة ، في المنتصف لحمل قطرة ماء أو مادة سائلة. إنها أغلى ثمناً وعادة ما تستخدم بدون غطاء.

يمكن أن تكون الشرائح القياسية إما بلاستيكية أو زجاجية ويكون مقاسها 1 × 3 بوصات (25 × 75 مم) وسماكة 1 إلى 1.2 مم.

ستستخدم الشرائح المبللة قسيمة غطاء أو غطاء زجاجي ، قطعة زجاجية مربعة رفيعة جدًا (أو بلاستيكية) توضع فوق قطرة العينة. بدون الغطاء في مكانه ، قد يتسبب التوتر السطحي في تجمع القطرة في قبة. يكسر الغطاء هذا التوتر ، ويسطح العينة ويسمح بفحص دقيق للغاية بأقل تركيز بؤري. يعمل الغطاء أيضًا على حماية العدسة الشيئية من التداخل مع قطرة العينة.

تلال

هناك أربع طرق شائعة لتركيب شريحة مجهر كما هو موضح أدناه:

جبل جاف

في التركيب الجاف ، يتم وضع العينة مباشرة على الشريحة. يمكن استخدام قسيمة غطاء للحفاظ على العينة في مكانها وللمساعدة في حماية العدسة الشيئية. تعتبر الحوامل الجافة مناسبة للعينات مثل عينات حبوب اللقاح أو الشعر أو الريش أو المواد النباتية.

جبل الرطب

في التركيب الرطب ، تُستخدم قطرة ماء لتعليق العينة بين الشريحة وغطاء الغطاء. ضع عينة على الشريحة. باستخدام ماصة ، ضع قطرة ماء على العينة. ثم ضعه على حافة الغطاء ، انزلق فوق العينة وقم بخفض الغطاء بعناية في مكانه باستخدام عود أسنان أو ما يعادله. ستساعد هذه الطريقة في منع احتباس فقاعات الهواء تحت غطاء الغطاء.

هدفك هو الحصول على ماء كافٍ لملء الفراغ بين انزلاق الغطاء والانزلاق. إذا كان هناك الكثير من الماء ، فسوف ينزلق الغطاء. خذ قطعة من المناديل الورقية وأمسكها بالقرب من إحدى حواف زلة الغطاء. هذا سوف يسحب بعض الماء. إذا كانت جافة جدًا ، أضف قطرة ماء بجانب قسيمة الغطاء. تدرب على هذا حتى تعتاد عليه.

تعتبر الحوامل الرطبة مناسبة لدراسة الكائنات الحية المرتبطة بالماء مثل البراميسيوم أو سوائل الجسم مثل اللعاب والدم والبول.

قسم جبل

في قسم التركيب ، يتم استخدام مقطع عرضي رفيع للغاية للعينة. باستخدام مبضع ، قم بقطع شريحة رقيقة من العينة التي اخترتها مثل البصل ، وضعها بعناية على الشريحة الخاصة بك. ثم اتبع التعليمات الخاصة بالحامل الجاف أو الرطب. غالبًا ما يمكن وضع البقعة مباشرة على العينة قبل تغطيتها بغطاء.

تعتبر حوامل المقاطع مفيدة لمجموعة متنوعة من العينات مثل الفاكهة والخضروات والمواد الصلبة الأخرى التي يمكن تقطيعها إلى شرائح صغيرة.

مسحة

يتم إجراء مسحة عن طريق تلطيخ طبقة رقيقة من العينة بعناية عبر شريحة ثم وضع قسيمة غطاء. عادة ، يجب ترك اللطاخة تجف في الهواء قبل وضع البقعة.

صبغات

تستخدم البقع للمساعدة في تحديد أنواع مختلفة من الخلايا باستخدام المجاهر الضوئية. إنها تعطي الصورة مزيدًا من التباين وتسمح بتصنيف الخلايا وفقًا لشكلها (مورفولوجيا). باستخدام مجموعة متنوعة من البقع المختلفة ، يمكنك صبغ مناطق مختلفة بشكل انتقائي مثل جدار الخلية أو النواة أو الخلية بأكملها. يمكن أن تساعد البقع أيضًا في التمييز بين الخلايا الحية والميتة.

تميل البقع إلى تصنيفها على أنها محايدة أو حمضية أو قاعدية ، اعتمادًا على تركيبتها الكيميائية وسوف تجذب أو تطرد الكائنات الحية المختلفة وفقًا لذلك. على سبيل المثال ، يستخدم العلماء والمهنيون الصحيون الميثيلين الأزرق ، وصمة عار قلوية قليلاً ، للكشف عن وجود حمض الديوكسي ريبونوكلييك ، المعروف أكثر باسم الحمض النووي.

أنواع البقع

اليود هي واحدة من أكثر البقع المتاحة شيوعًا وتستخدم لتحديد النشا في مجموعة متنوعة من العينات. سوف يلطخ الكربوهيدرات في النباتات والعينات الحيوانية باللون البني أو الأزرق الداكن. سيظهر الجليكوجين باللون الأحمر.

الميثيلين الأزرق هي بقعة قلوية مفيدة في تحديد نوى الخلايا الحمضية والحمض النووي في عينات الحيوانات أو البكتيريا أو الدم. كما أنه مفيد في أحواض السمك لمنع انتشار العدوى الفطرية في الأسماك. رؤية المزيد من التفاصيل و GT

يوزين واي هي بقعة حمضية تلون الخلايا القلوية باللون الوردي (السيتوبلازم ، على سبيل المثال). لونه أحمر لخلايا الدم والسيتوبلازم وأغشية الخلايا. أهم الاستخدامات الطبية لـ Eosin هي اختبار الدم ونخاع العظام ، بما في ذلك مسحة PAP. رؤية المزيد من التفاصيل و GT

بقعة غرام هي إحدى العمليات الأكثر استخدامًا في تحديد البكتيريا وندش المستخدمة يوميًا في المستشفيات. إنه اختبار أولي يقسم البكتيريا بسرعة وفعالية من حيث التكلفة إلى نوعين: موجب الجرام أو سالب الجرام. رؤية المزيد من التفاصيل و GT


زلات غطاء المجهر

كيف تعرف متى تستخدم زلة غطاء المجهر؟ وإذا كنت بحاجة إلى استخدام واحدة ، فما السُمك المناسب؟ سيجيب هذا المنشور على كل هذه الأسئلة ونأمل أن يساعدك في معرفة الوسائط التي ستنتج أفضل الصور تحت المجاهر المختلفة.

ما نوع المجهر الذي تستخدمه؟

السؤال الأول الذي يجب أن تجيب عليه ما هو نوع المجهر الذي تستخدمه؟ بعض المجاهر لا تتطلب استخدام غطاء على الإطلاق. فيما يلي قائمة بمجموعة متنوعة من المجاهر واستخدامها لغطاء الشرائح:

  • مجاهر ستيريو - عند استخدام مجهر استريو ، لا تحتاج إلى استخدام قسيمة غطاء. توضع العينة مباشرة على مرحلة المجهر ولا يتم وضعها عادةً على شريحة مجهر على الإطلاق.
  • المجاهر البيولوجية المقلوبة - تستخدم أطباق بتري مع مجاهر مقلوبة لاحتواء عينات حية في سائل.لا تُستخدم شرائح الغطاء مع طبق بتري ، لكن سمك طبق بتري يمكن أن يكون مهمًا. سنتحدث أكثر عن هذا أدناه.
  • المجاهر المعدنية المقلوبة - عند استخدام مجهر معدني مقلوب ، ستكون العينة مسطحة وقد يتم صقلها. توضع العينة مباشرة على المسرح ولا تستخدم شريحة أو غطاء.
  • المجاهر البيولوجية المستقيمة (المجاهر المركبة) - يشار أحيانًا إلى المجاهر البيولوجية المستقيمة بالمجاهر المركبة. عند استخدام مجهر بيولوجي قائم ، يتم استخدام شريحة وغطاء.
  • المجاهر المعدنية المستقيمة - لا تتطلب المجاهر المعدنية العمودية استخدام شريحة أو غطاء منزلق. في بعض الأحيان يتم استخدام واحدة إذا كانت العينة عبارة عن مسحوق ويجب تسطيحها أو احتوائها ، ولكن عادةً ما يتم وضع العينة مباشرة على المسرح. يتم أيضًا وضع رقع المرشح مباشرة على المسرح تحت مجهر معدني عمودي.
  • المجاهر المستقطبة - يمكن استخدام المجاهر المستقطبة لعرض الأجزاء الرقيقة من الصخور أو المعادن أو حتى المواد المسحوقة. اعتمادًا على العينة ، يتم استخدام شريحة وغطاء في بعض الأحيان لتسطيح العينة واحتوائها.

عند عرض المقاطع أو المسحات (عادةً ما تكون ذات طبيعة بيولوجية) ، يجب تثبيتها على شريحة. يتم حفظ العينة أو تحضيرها باستخدام وسط (وصمة عار) عن طريق وضع قسيمة غطاء أعلى العينة على الشريحة. يمكن وضع أقسام رقيقة من عينات النبات على شريحة بها قطرة ماء مع غطاء منزلق أعلى النبات لتسويته.

ألقِ نظرة على عدسة المجهر الموضوعية الموضحة على اليسار. هذا الهدف عبارة عن عدسة موضوعية ذات مخطط 20x مع فتحة عددية (NA) تبلغ 0.45. يخبرنا رمز اللانهاية أنها عدسة مصححة إلى ما لا نهاية وبعد هذا الرمز تظهر العدسة "0.17". يشير هذا إلى سماكة الغطاء.

تم تصميم العدسات الموضوعية للضوء المرسل القياسية من أجل انزلاق غطاء 0.17 مم بين العينة والعدسة. يبلغ سمك شرائح الغطاء القياسية 0.13-0.16 مم ، مع الأخذ في الاعتبار الطبقة المضافة لوسط التضمين أو الماء في نتائج العينة لتلبية قاعدة 0.17 مم.

كلما زادت الفتحة العددية للعدسة الشيئية ، زادت الحساسية للانحرافات عن القيمة الموجودة على العدسة الشيئية. على سبيل المثال ، يمكن استخدام عدسة موضوعية 4x / 0.10 مع أو بدون غطاء غطاء ولن يلاحظ أي فرق. ولكن إذا تم استخدام عدسة موضوعية بقيمة 40x / 0.95 ، فإن أي اختلاف في متطلبات قسيمة الغطاء قد ينتج عنه صورة غير واضحة ونقية. في هذه الحالة ، فإن استخدام السماكة المناسبة لغطاء الغطاء ، بالإضافة إلى ضمان قطع العينات بدقة في مقطع رفيع (سمك 1-5 ميكرون) سيؤدي إلى الحصول على أوضح الصور عالية الجودة.

بالإضافة إلى ذلك ، إذا تم استخدام الكثير من المحلول بين شريحة الغطاء وشريحة المجهر (مثل البقعة أو السائل) ، فقد يؤدي ذلك إلى إتلاف الصورة. عند إعداد الشرائح ، يمكن أن يساعد في الضغط على زلة الغطاء في الشريحة بطرف إبرة (لتجنب بصمات الأصابع على الشريحة أثناء تسويتها) ، بالإضافة إلى مسح السوائل الزائدة بمنشفة ورقية موضوعة على حافة الغطاء ينزلق.

سيتم تمييز بعض العدسات الموضوعية بالرقم "0". يشير هذا إلى أن العدسة الشيئية لا تتطلب استخدام زلة غطاء على الإطلاق. في بعض المجالات ، تُستخدم هذه العدسات الموضوعية لتوفير الوقت عن طريق جعل إعداد الشرائح أسرع.

عند استخدام مجهر بيولوجي مقلوب ، تحتوي أطباق بتري أو القوارير أو لوحات البئر على عينات مجهرية. يبلغ سمك هذه الأوعية 1 مم في الأسفل. لذلك يتم تمييز العدسات الموضوعية المستخدمة مع هذه الأوعية بمؤشر 1.1 مم. يأتي 0.1 مم الإضافي من الماء أو وسط الأجار في طبق بتري.

نظرًا لمسافة العمل المحسّنة في عدسات الأهداف المجهرية المقلوبة ، لا يتم دفعها إلى الدقة القصوى (NA). تم إنشاء المجهر المقلوب لتحسين حرية المناولة التي يوفرها للعينات ولم يتم إنشاؤه لتقييم حدود الدقة. إذا كنت ترغب في استخدام عدسة موضوعية مقاس 0.17 مم على مجهر مقلوب ، فتأكد من استخدام طبق بتري بقاعدة زجاجية مقاس 0.17 مم ، أو يمكنك قلب الشريحة الزجاجية رأسًا على عقب. بالطبع إذا كنت تستخدم شريحة تحتوي على سائل ، فلن يكون من المفيد قلبها رأسًا على عقب.

في المرة القادمة التي تقوم فيها بإعداد عينات للميكروسكوب الخاص بك ، ألق نظرة على العدسة الشيئية وتأكد من أنك تستخدم سماكة انزلاق الغطاء المناسبة للعدسة.

إذا كانت لديك أسئلة بخصوص زلات غطاء المجهر والحصول على أفضل صورة بالعدسة الموضوعية ، فاتصل بـ Microscope World وسنكون سعداء لمساعدتك.


3 - 1 استخدام المجهر

يعتبر المجهر ، كما هو موضح في الشكل 3-1 ، أحد أهم الأدوات التي يستخدمها عالم الأحياء الدقيقة. من أجل دراسة الخصائص المورفولوجية والتلطيقية للكائنات الحية الدقيقة مثل البكتيريا والخمائر والعفن والطحالب والبروتوزوا ، يجب أن تكون قادرًا على استخدام المجهر بشكل صحيح.

الشكل 3.1. المجهر الضوئي. مجهر ضوئي حديث. هذا مثال من النوع المستخدم في معامل التدريس بجامعة ويسكونسن ماديسون. يتم تمييز الأجزاء المختلفة من المجهر. من فضلك خذ الوقت الكافي للتعرف على أسمائهم.

المجهر المركب المستخدم في علم الأحياء الدقيقة هو أداة دقيقة تتلف بسهولة أجزائه الميكانيكية ، مثل المرحلة الميكانيكية المعايرة ومقابض الضبط ، وجميع العدسات ، وخاصة هدف الغمر بالزيت ، حساسة ومكلفة. تعامل مع الأداة بعناية وحافظ عليها نظيفة.

المجهر هو في الأساس نظام بصري (للتكبير) ونظام إضاءة (لجعل العينة مرئية). للمساعدة في فهم وظيفة الأجزاء المختلفة من المجهر ، سوف نتبع شعاع الضوء وهو يشق طريقه عبر المجهر من مصدر الضوء ، عبر العدسات ، حتى العين. يتتبع الشكل 3-8 مسار الضوء عبر أجزاء المجهر

الشكل 3.8. مسار الضوء من خلال المجهر. المجاهر الحديثة هي أدوات دقيقة معقدة. الضوء ، الناشئ من مصدر الضوء (1) ، يركز بواسطة المكثف (2) على العينة (3). ثم يدخل الضوء إلى العدسة الشيئية (4) ويتم تكبير الصورة. يمر الضوء بعد ذلك عبر سلسلة من المناشير الزجاجية والمرايا ، ويدخل في النهاية إلى العدسة العينية (5) حيث يتم تكبيرها بشكل أكبر ، مما يؤدي في النهاية إلى إعادة تفعيل العين.

أولاً ، دعونا نفكر في السمة الأساسية لجميع المجاهر ، مصدر الضوء. الإضاءة المناسبة ضرورية للاستخدام الفعال للمجهر. عادة ما يعمل مصباح خيوط التنغستن كمصدر للإضاءة. إذا تم استخدام الإضاءة المنعكسة ، فإن المصباح المنفصل يوفر شعاعًا مركّزًا من الضوء ينعكس إلى أعلى من خلال عدسات المكثف بواسطة مرآة.

يتم تمرير الضوء من مصدر الإضاءة من خلال مكثف المحطة الفرعية. يخدم المكثف غرضين ، فهو ينظم كمية الضوء التي تصل إلى العينة ويركز الضوء القادم من مصدر الضوء. مع زيادة تكبير العدسة الشيئية ، هناك حاجة إلى مزيد من الضوء. ينظم غشاء القزحية (الموجود في المكثف) كمية الضوء التي تصل إلى العينة. يقوم المكثف أيضًا بجمع الحزمة العريضة من الضوء الناتج عن مصدر الضوء ويركزها على المنطقة الصغيرة من العينة التي تخضع للمراقبة.

ثم يمر الضوء من خلال الشريحة إلى العدسة الشيئية حيث يحدث التكبير الأول للصورة. يزيد التكبير من الحجم الظاهر لجسم ما. في المجهر الضوئي المركب ، تقوم عدستان ، واحدة بالقرب من المرحلة تسمى العدسة الموضوعية والأخرى في العدسة العينية ، بتكبير العينة. يتم نقش القوة المكبرة للعدسة الشيئية في حامل العدسة. تحتوي المجاهر في معظم مختبرات الأحياء الدقيقة على ثلاث عدسات موضوعية: عدسة موضوعية منخفضة الطاقة (10x) ، وعدسة موضوعية عالية الجفاف (40X) وعدسة موضوعية مغمورة بالزيت (100X). يتم تدوير العدسة الموضوعية المرغوبة إلى وضع العمل عن طريق قطعة الأنف الدوارة.

على جانبي قاعدة المجهر توجد مقابض ضبط دقيقة ودقيقة ، تستخدم لإبراز الصورة. سيؤدي دوران هذه المقابض إما إلى تحريك العينة والأهداف بالقرب أو بعيدًا. يحرك التعديل الخشن الأنف بزيادات كبيرة ويجلب العينة إلى التركيز التقريبي. يعمل الضبط الدقيق على تحريك الأنف ببطء أكثر للحصول على تركيز نهائي دقيق. في بعض المجاهر ، سيؤدي دوران المقابض الدقيقة وضبط المسار إلى تحريك المرحلة بدلاً من الأنف.

التكبير وحده ليس الهدف الوحيد للمجهر. يمكن تكبير صورة معينة بدقة دون إظهار أي زيادة في التفاصيل. المقياس الحقيقي للميكروسكوب هو قدرته على التحليل. تكمن قوة حل العدسة في قدرتها على الكشف عن التفاصيل الدقيقة وجعل الأشياء الصغيرة مرئية بوضوح. يتم قياسه من حيث أصغر مسافة بين نقطتين أو خطين حيث يمكن رؤيتهما ككيانات منفصلة بدلاً من صورة واحدة غير واضحة. تسمح لنا القدرة التحليلية للعدسة الموضوعية ، المحفورة على العدسة ، بالتنبؤ بالعدسة الموضوعية التي يجب استخدامها لمراقبة عينة معينة. ومع ذلك ، فإن وجود دقة جيدة في المجهر لا يضمن صورة مرئية ، فإن قوة التحليل للعين البشرية محدودة للغاية. غالبًا ما تكون هناك حاجة إلى مزيد من التكبير للحصول على صورة جيدة.

عندما تكون العدسة الموضوعية المغمورة بالزيت قيد الاستخدام ، يصبح الفرق بين قدرة ثني الضوء (أو معامل الانكسار للوسط الذي يحتفظ بالعينة) والعدسة الشيئية مهمًا. نظرًا لأن معامل انكسار الهواء أقل من الزجاج ، فإن أشعة الضوء تنحني أو تنكسر أثناء مرورها من شريحة المجهر إلى الهواء ، كما هو موضح في الشكل 3-9. ينكسر العديد من هذه الأشعة الضوئية بزاوية كبيرة لدرجة أنها تفقد العدسة الشيئية تمامًا. هذا الفقد في الضوء شديد لدرجة أن الصور تتدهور بشكل كبير. وضع قطرة من زيت الغمر ، الذي له معامل انكسار مشابه للزجاج ، بين الشريحة والعدسة الموضوعية يقلل هذا الانكسار ، ويزيد من كمية الضوء التي تمر من العينة إلى العدسة الشيئية. ينتج عن هذا دقة أكبر وصورة أوضح.

الشكل 3.9. انكسار الضوء عند 100X. ينكسر الضوء الذي يخرج من الشريحة ، في الهواء ، باتجاه العدسة الشيئية ، بسبب الاختلاف في معامل الانكسار بين الهواء والزجاج. في حين أن سبب الانحناء بسبب هذا الاختلاف ليس مهمًا عند 100X و 400X ، فإن هذا الانكسار عند 1000X يسبب مشكلة ، مما يتسبب في ضبابية الصورة وفقدان كبير للضوء. زيت الغمر له معامل انكسار مشابه جدًا للزجاج. وضع قطرة زيت بين العدسة الشيئية والشريحة يمنع انحناء أشعة الضوء ويوضح الصورة. يمثل الخط الأزرق المتقطع شعاعًا ضوئيًا محتملاً في حالة عدم وجود زيت غاطس. يمثل الخط الأحمر المتقطع شعاعًا خفيفًا في حالة وجود زيت مغمور.

تستمر صورة العينة من خلال سلسلة من المرايا و / أو المناشير التي تثنيها باتجاه العدسة. يحدث تكبير إضافي في العدسة لإنتاج ما يسمى بالصورة الافتراضية. التكبير الكلي يساوي ناتج تكبير العدسة والتكبير الموضوعي. غالبًا ما يتم تكبير العدسات العينية بمقدار 10 أضعاف مما يؤدي إلى تكبير إجمالي قدره 100 أو 400 أو 1000X ، اعتمادًا على الهدف الموجود. تحتوي العديد من المجاهر الحديثة أيضًا على عدسات قابلة للتركيز لتعويض الاختلافات بين الأفراد وحتى بين عيون الفرد. تعديل هذه مهم وهو موضح أدناه.

3 - 2 إجراءات التشغيل

فيما يلي نصف الاتجاهات التفصيلية لاستخدام المجهر. سيعطيك هذا تقديرًا لعملهم. تمت كتابة هذه التوجيهات بشكل عام قدر الإمكان ، ولكن قد يكون من الضروري لمدرسك إجراء تعديلات على المجاهر الدقيقة التي تستخدمها. تم تصميم المجاهر الضوئية المستخدمة في المعامل التعليمية لسهولة الاستخدام ويجب أن تصبح تلقائية مع بعض الممارسات.

ارفع الأنف باستخدام مقبض ضبط المسار. يوفر هذا وصولاً أكبر لوضع الشريحة على المسرح.

قم بتدوير قطعة الأنف بحيث تكون العدسة الموضوعية 10x في وضع التشغيل.

افتح غشاء القزحية في منتصف الطريق تقريبًا.

قم بتشغيل مصباح الإضاءة في القاعدة عن طريق الضغط على مفتاح نوع الدفع.

ضع شريحة عينة ملطخة على المسرح وبالعين المجردة ضع العينة أعلى مركز المكثف مباشرة.

استخدم الإبهام أسفل العدسات لضبط المسافة بين العدستين. من المهم أن تكون قادرًا على عرض العينات بكلتا العينين ، وزيادة جودة الصورة إلى أقصى حد ومنع التعب من الاستخدام المطول لعين واحدة.

حرك مكثف المجهر عن طريق مقبض ضبط المكثف حتى يصبح الجزء العلوي من المكثف تقريبًا في أعلى موضع. يجب أن يكون هناك مساحة كافية لإدخال قطعة من الورق بين المسرح والمكثف ، ولكن ليس أكثر. سيؤدي ذلك إلى تركيز الضوء على الشريحة.

قم بتدوير مقبض الضبط الخشن في اتجاه عقارب الساعة لتقريب الهدف 10x من الشريحة. انظر من خلال العدسات ، ودون إزعاج إعداد الضبط الخشن ، قم بتدوير مقبض الضبط الدقيق ببطء حتى تصبح العينة في أقصى تركيز ممكن.

أنبوب العدسة الأيسر قابل للتركيز للتعويض عن اختلافات انكسار العين. الإجراء الصحيح هو إحضار العينة إلى تركيز حاد بالنظر من خلال العدسة اليمنى فقط. ثم ركز على العين اليسرى عن طريق تدوير طوق أنبوب العين الأيسر بالكامل عكس اتجاه عقارب الساعة. بعد ذلك ، أثناء عرض العينة بالعين اليسرى ، قم فقط بإدارة طوق مخرش في اتجاه عقارب الساعة حتى تصبح العينة في بؤرة حادة. لا تقم بضبط مقبض الضبط الدقيق أثناء هذا الإجراء.

قم بإزالة العدسة لعرض الفتحة الخلفية للعدسة الشيئية. أغلق غشاء قزحية المكثف ، ثم أعد فتحه حتى تختفي أوراق الحجاب الحاجز عن الأنظار. استبدل العدسة واعرض العينة. يمكن إغلاق غشاء قزحية العين قليلاً لتحسين التباين ، خاصةً عند مشاهدة عينات غير ملوثة.

العينات غير الملوثة لها تباين ضئيل فقط مع البيئات المحيطة بها. ونتيجة لذلك ، يمكن عادةً رؤيتها بشكل أكثر فعالية عن طريق ضبط الحجاب الحاجز عند الحد الأدنى للفتحة أو بالقرب منها. يؤدي تقليل إعداد الحجاب الحاجز إلى زيادة التعريف والتباين وعمق التركيز البؤري ولكنه يؤدي إلى حدوث مشكلات الانعراج والتضحية بالدقة. العب مع إعداد الحجاب الحاجز وحدد أفضل حل وسط عن طريق التجربة والخطأ.

بمجرد أن تكون العينة في تركيز حاد باستخدام العدسة الموضوعية 10x ، فمن الممكن بعد ذلك تدوير الأنف إلى العدسة الموضوعية 40X دون تغيير موضع مقبض الضبط الخشن. مطلوب القليل جدًا من إعادة التركيز باستخدام مقبض الضبط الدقيق نظرًا لأن معظم العدسات الموضوعية لمجهر الضوء ذات بؤري. تذكر أنه يجب تغيير إعداد غشاء قزحية العين للسماح بمرور المزيد من الضوء على الرغم من زيادة التكبير.

إذا كان سيتم عرض العينة باستخدام عدسة الغمر بالزيت 100X ، فيجب وضع زيت الغمر على الشريحة.

قم بتدوير العدسة الشيئية 40X قليلاً إلى الجانب بحيث يمكن وضع قطرة من زيت الغمر على العينة دون الحصول عليها على العدسة 40X.

ضع قطرة من زيت الغمر في وسط دائرة الضوء المتكونة على شريحة العينة.

أدر قطعة الأنف بعناية حتى تستقر العدسة الشيئية 100X في مكانها. يجب أن تكون العدسة الموضوعية في الزيت ولكن يجب ألا تلمس الشريحة.

قم بزيادة شدة الضوء حسب الحاجة وقم بتدوير مقبض الضبط الدقيق للحصول على تركيز حاد للعينة. إذا لزم الأمر ، قم بإجراء المزيد من التعديلات للحصول على الإضاءة المثلى.

إذا لم يكن المجهر غير محدد البؤرة ، فسيكون من الضروري خفض العدسة الشيئية في أقرب مكان ممكن من الشريحة دون لمسها. يتم ذلك فقط أثناء النظر إلى العدسة والانزلاق من جانب المجهر. اعرض العينة عن طريق رفع العدسة الشيئية ببطء بمقبض الضبط الخشن. بعد ذلك ، ركز بمقبض الضبط الدقيق واضبط الإضاءة حسب الضرورة. إذا لم ينجح ذلك في المرة الأولى ، كرر الإجراء بأكمله.

في كثير من الحالات ، يجب ملاحظة المستحضر فقط تحت عدسة الغمر بالزيت. في هذه الحالة ، حدد موقع العينة أولاً وقم بتوسيطها في الحقل باستخدام عدسة موضوعية منخفضة الطاقة. ثم أضف الزيت وقم بتدوير العدسة الشيئية لغمر الزيت في موضعها.

3 - 3 مشاكل شائعة

قد تواجه بعض المشاكل الحقيقية أو الظاهرة أثناء تشغيل المجهر الخاص بك. فيما يلي دليل لحل المشكلات لمساعدتك إذا كنت تواجه صعوبة في تركيز عينة.

يمكن تركيز العينة على 10x ، ولكن من الصعب العثور عليها أو تشويشها عند 40X.

غالبًا ما يحدث هذا بسبب غمر الزيت في العدسة 40X. امسح العدسة 40X بورق العدسة لإزالة الزيت وإعادة التركيز. يمكن منع ذلك من خلال عدم عرض عينة ذات هدف 40X مطلقًا بعد إضافة زيت غمر إلى شريحة.

يمكن تركيز العينة على 10x ولكن عندما يتم تدوير العدسة 40X في مكانها ، فإنها تلامس الشريحة.

في معظم الحالات ، يحدث هذا بسبب وضع الشريحة على المنصة رأسًا على عقب Ã ¢ - حيث تواجه اللطاخة المرحلة. تحقق من شريحتك بعناية للتأكد من وضعها على المنصة بشكل صحيح.

لا يدور مقبض الضبط الدقيق في الاتجاه المطلوب للتركيز البؤري الحاد.

وهذا يدل على أنها تحولت إلى حدود خيوطها ، إما لأعلى أو لأسفل ، حسب الأحوال. قم بلفها مرة أخرى إلى حوالي نصف مسافة الخيط (حوالي أربع لفات) ، استخدم الضبط الخشن لرفع أو خفض العدسة الموضوعية بشكل كافٍ لعرض العينة ثم أعد التركيز مع الضبط الدقيق.

ما أشاهده لا يشبه البكتيريا.

تحقق للتأكد من أنك في المستوى البؤري الصحيح أنك تركز على اللطاخة وليس الغبار على العدسات. للتحقق من ذلك ، انقل الشريحة أثناء النظر إليها. يجب أن يتحرك أي شيء في المسحة في مجال الرؤية.

ما أشاهده لا يشبه البكتيريا. الجزء الثاني

إذا كنت في المستوى البؤري الصحيح ، فقد تكون هناك مشاكل في تحضير اللطاخة. هل قمت بإصلاح الكثير من الحرارة؟ هل كانت كمية الثقافة المطبقة كافية؟ هل لطخت الشريحة بشكل صحيح؟ يمكن أن تعزى العديد من مشاكل المجهر الواضحة إلى ضعف إعداد الشرائح.

3 - 4 العناية السليمة بالمجهر

ستساعد القواعد والتنبيهات وتلميحات الصيانة التالية في الحفاظ على الميكروسكوب الخاص بك في حالة تشغيل جيدة.

استخدم كلتا يديك عند حمل المجهر: يمسك أحدهما بذراع المجهر بقوة والآخر تحت القاعدة. تجنب صخب المجهر الخاص بك.

للحفاظ على نظافة المجهر وأنظمة العدسة:

لا تلمس العدسات أبدًا. إذا أصبحت العدسات متسخة ، امسحها برفق باستخدام مناديل العدسة.

إذا ظهرت بقع غير واضحة في مجال الرؤية ، فقد يكون ذلك بسبب الوبر أو المسحات على العدسة. إذا تحركت البقع أثناء تدوير العدسة ، فإن الغبار يكون على العدسة ويتم تنظيف العدسة الخارجية للعدسة بالترتيب. إذا تم تحسين جودة الصورة عن طريق تغيير العدسات الشيئية ، فقم بتنظيف العدسة الشيئية بورق العدسة.

لا تترك شريحة على المجهر عندما لا يكون قيد الاستخدام.

قم دائمًا بإزالة الزيت من العدسة الشيئية المغمورة بالزيت بعد استخدامها.إذا حدث خطأ في أن يصطدم الزيت بأي من العدسات الموضوعية منخفضة الطاقة ، فقم بمسحه على الفور باستخدام أنسجة العدسة.

حافظ على مرحلة المجهر نظيفة وجافة. في حالة انسكاب أي سوائل ، جفف المرحلة بقطعة من القماش القطني. إذا كان الزيت سيصعد على خشبة المسرح ، بلل قطعة من القماش القطني بالزيلول ونظف المرحلة ، ثم امسحها حتى تجف.

عندما لا تكون قيد الاستخدام ، قم بتخزين المجهر الخاص بك في الخزانة الخاصة به. ضع العدسة الشيئية منخفضة الطاقة في موضعها عند أدنى نقطة لها فوق المسرح. تأكد من أن المرحلة الميكانيكية لا تتجاوز حافة مرحلة المجهر. لف السلك الكهربائي حول القاعدة.

لتجنب كسر المجهر:

لا تفرض التعديلات أبدًا. يجب أن تعمل جميع التعديلات بحرية وسهولة. إذا لم يعمل أي شيء بشكل صحيح ، فلا تحاول إصلاحه بنفسك ، وأبلغ مدرسك على الفور.

لا تسمح مطلقًا لعدسة موضوعية بالتكدس أو حتى لمس الشريحة أو غطاء الانزلاق.

لا تركز أبدًا لأسفل مع الضبط الخشن أثناء النظر من خلال المجهر. قم دائمًا بإمالة رأسك إلى الجانب مع وجود عيون موازية للشريحة وراقب الهدف وأنت تقربه من الشريحة. سيمنعك هذا من تحطيم الهدف في الشريحة.

لا تقم أبدًا بتبديل العدسات الموضوعية أو العدسات العينية لمجاهر مختلفة ، ولا تقم مطلقًا بإزالة العدسات الأمامية تحت أي ظرف من الظروف من العدسات الموضوعية.

لا تحاول أبدًا حمل مجهرين في وقت واحد

إذا اتبعت هذه القواعد ، فلن تواجه مشكلة مع المجهر الخاص بك.

3 - 5 تلطيخ الكائنات الحية الدقيقة

عادةً ما يعتمد التحديد الأولي للبكتيريا على مورفولوجيا الخلية وتجميعها والطريقة التي تتفاعل بها مع إجراءات تلطيخ معينة. الغرض من هذا القسم هو توضيح بعض تفاعلات التلوين الشائعة المستخدمة لتصنيف الكائنات الحية الدقيقة.

الشكل 3.2. مسحة بكتيرية غير ملوثة. تتكون البكتيريا غير الملوثة في الغالب من الماء وتكون شفافة تقريبًا عند عرضها من خلال مجهر ضوئي (في الصورة على اليسار). لاحظ أن معظم الميكروبات غير مرئية ، ولكن تظهر خصائص الغبار في وسط مجال الرؤية. تتشبث البقع بالشحنات الموجبة والسالبة للبكتيريا ، لكنها لا تلتصق بسهولة بخلفية الانزلاق. ولذلك فهي تفرق بين الميكروبات ومحيطها. تظهر البكتيريا الملطخة في 40X و 100X في الوسط واللوح الأيمن.

تكون البكتيريا غير الملوثة شفافة عمليًا عند عرضها باستخدام المجهر الضوئي ، وبالتالي يصعب رؤيتها كما هو موضح في الشكل 3-2. كان تطوير الأصباغ لتلطيخ الكائنات الحية الدقيقة تقدمًا كبيرًا في علم الأحياء الدقيقة. تخدم البقع عدة أغراض:

تميز البقع الكائنات الحية الدقيقة عن البيئة المحيطة بها

أنها تسمح بالمراقبة التفصيلية للهياكل الميكروبية عند التكبير العالي

يمكن أن تساعد بروتوكولات تلطيخ معينة في التمييز بين أنواع مختلفة من الكائنات الحية الدقيقة.

تتكون معظم الأصباغ من مجموعتين كيميائيتين وظيفيتين كما هو موضح في الشكل 3-3. مجموعة Chromophore ، والتي تعطي الصبغات لونها المميز ومجموعة auxochrome ، التي تحتوي على بنية كيميائية مؤينة ، مما يساعد على إذابة الصبغة ويسهل الارتباط بأجزاء مختلفة من الكائنات الحية الدقيقة. في السابق ، كانت الأصباغ تصنف على أنها حمضية أو قاعدية ، اعتمادًا على ما إذا كانت الصبغة مشحونة سلبًا أو إيجابيًا عند درجة حموضة متعادلة. بشكل أكثر دقة ، يمكن الإشارة إلى الأصباغ على أنها أنيونية (-) أو كاتيونية (+) وهذه هي الاتفاقية التي سيتم استخدامها في هذا الدليل. تتفاعل الأصباغ الكاتيونية (البنفسجي الكريستالي والأزرق الميثيلين) مع مجموعات البكتيريا التي لها شحنة سالبة. سوف تتفاعل الأصباغ الأنيونية (إيوزين ، نيجروزين) مع المجموعات التي لها شحنة موجبة. نظرًا لأن معظم البكتيريا تحتوي على العديد من المجموعات الإيجابية والسلبية في جدرانها الخلوية والأسطح الأخرى ، فإنها ستتفاعل مع كل من الأصباغ الموجبة والأنيونية.

الشكل 3.3. هيكل الكريستال البنفسجي. مجموعات auxochrome من الكريستال البنفسجي هي الكربون المشحون في مركز الجزيء. عادة ما يتم تحييد هذا بواسطة Cl - ion. تتكون مجموعة chromophore من ثلاث حلقات بنزين والكربون المركزي. تمتص هذه الهياكل الضوء بسهولة.

يمكن تقسيم بروتوكولات التلوين إلى 3 أنواع أساسية ، بسيطة وتفاضلية ومتخصصة. تتفاعل البقع البسيطة بشكل موحد مع جميع الكائنات الحية الدقيقة وتميز فقط الكائنات الحية من محيطها. تميز البقع التفاضلية بين البكتيريا المختلفة ، اعتمادًا على التركيب الكيميائي أو الفيزيائي للكائن الدقيق. صبغة جرام هي مثال على صبغة تفاضلية. تكتشف البقع المتخصصة هياكل محددة للخلايا مثل الأسواط والأبواغ الداخلية.

3-6 تحضير مسحة بكتيرية للتلطيخ

قبل تلطيخ ومراقبة الميكروب تحت المجهر ، يجب تحضير مسحة. الهدف من تحضير اللطاخة هو وضع تركيز مناسب من الخلايا على شريحة ثم تثبيتها هناك حتى لا تغسل أثناء إجراء التلوين التالي. يوضح الشكل 3-4 تحضير اللطاخة.

أفضل اللطاخات مصنوعة من البكتيريا التي نمت على سطح صلب مثل مائل أجار أو لوحة. يتم خلط القليل من النمو من الثقافة مع الماء المقطر أو ماء الصنبور لتشكيل محلول معكر قليلاً وينتشر هذا على شريحة نظيفة خالية من الشحوم. عند تلطيخ ثقافات المرق ، يتم نقل قطرة من المرق مباشرة إلى شريحة ، دون استخدام ماء إضافي. الإجراء الخاص بعمل اللطاخة هو كما يلي:

إذا تم فحص أكثر من مزرعة باستخدام نفس البقعة ، فمن الممكن تحضير ما يصل إلى 6 مسحات على نفس الشريحة. قبل تحضير الشريحة ، قم بتقسيمها إلى عدد مناسب من الأقسام وقم بتسمية كل قسم على الجانب السفلي من الشريحة بوضوح.

إذا كانت ثقافتك قد نمت على طبق أجار مائل أو طبق أجار. ضع قطرة صغيرة من الماء على شريحة نظيفة وخالية من الدهون. بعد ذلك ، باستخدام حلقة معقمة أو إبرة سلكية مستقيمة ، انقل جزءًا صغيرًا من النمو إلى قطرة الماء وافرك الإبرة حولها حتى تصبح المادة مستحلبًا بشكل متساوٍ. انشر القطرة على جزء من الشريحة لعمل فيلم رقيق. يجب أن يكون التعليق عكرًا قليلاً فقط.

إذا كنت تستخدم مزرعة المرق ، فيجب أن تحتوي ثقافة المرق على تعكر واضح. انقل كمية من الثقافة من المرق إلى شريحة نظيفة خالية من الدهون. انشر القطرة على جزء من الشريحة لعمل فيلم رقيق.

اترك الفيلم ليجف في الهواء. للحصول على بقعة جيدة ، من المهم ترك اللطاخة تجف تمامًا. الماء الزائد المتبقي على الشريحة سوف يغلي خلال مرحلة التثبيت ، مما يتسبب في تمزق معظم الميكروبات الموجودة. الاستعجال في هذه الخطوة سينتج عنه بقعة نهائية سيئة.

بمجرد أن تجف ، "ثبت" اللطاخة على الشريحة بتمرير الجزء السفلي من الشريحة عبر طرف لهب الموقد عدة مرات لمدة ثانية واحدة. بعد تثبيت الحرارة ، المس بيدك الجزء الساخن من الشريحة. يجب أن يكون دافئًا بشكل مريح ، لكن لا يحترق.

احرص على عدم التثبيت السفلي (ستغسل اللطاخة) أو الحرارة الزائدة (ستتمزق الخلايا أو تشوه) الشريحة. يتم تعلم المقدار الصحيح من التثبيت الحراري من خلال التجربة.

دع المسحة تبرد ثم ضع البقعة.

3 - 7 البقعة البسيطة

في بقعة بسيطة ، يتم تلطيخ المسحة بمحلول صبغة واحدة تلطخ جميع الخلايا بنفس اللون. التمايز بين أنواع الخلايا أو الهياكل ليس الهدف من البقعة البسيطة. ومع ذلك ، يمكن رؤية بعض الهياكل التي لم يتم تلطيخها بهذه الطريقة بسهولة ، على سبيل المثال ، الأبواغ الداخلية وشوائب الدهون.

البقع البسيطة بسيطة جدًا. يقوم المرء بعمل مسحة ويطبق بقعة واحدة على الشريحة. يوجد أدناه إجراء للبقع البسيطة.

تحضير وتثبيت مسحة من الكائن الحي لدراستها.

قم بتغطية اللطاخة بمحلول التلوين. إذا تم استخدام الكريستال البنفسجي أو السافرانين ، اتركه دقيقة واحدة للتلوين. يتطلب استخدام الميثيلين الأزرق 3-5 دقائق لتحقيق تلطيخ جيد.

اغسل الصبغة بحرص بماء الصنبور وجفف الشريحة باستخدام ورق نشاف أو وسادة ورقية ماصة أو منشفة ورقية.

ثلاث خطوات ، الآن ألم يكن بهذه السهولة؟

يوضح الفيلم أعلاه البقعة البسيطة.

يوضح الشكل 3-10 صورة مجهرية ضوئية لما يجب أن تبدو عليه البقعة البسيطة.

الشكل 3.10. البقعة البسيطة. صورة مجهرية لبقعة بسيطة بتكبير 1000X. لاحظ أن جميع الخلايا ، بغض النظر عن الأنواع أو بناء جدار الخلية ، تلطخ نفس اللون.

3-8 صبغة جرام

تُفرِّق صبغة جرام ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح ، جميع البكتيريا تقريبًا إلى مجموعتين رئيسيتين. على سبيل المثال ، مجموعة واحدة ، البكتيريا موجبة الجرام ، تشمل العوامل المسببة لأمراض الدفتيريا ، والجمرة الخبيثة ، والكزاز ، والحمى القرمزية ، وأنواع معينة من الالتهاب الرئوي والتهاب اللوزتين. المجموعة الثانية ، البكتيريا سالبة الجرام ، وتشمل الكائنات الحية التي تسبب حمى التيفود والدوسنتاريا والسيلان والسعال الديكي. في البكتيريا ، يتم تفسير رد الفعل على كواشف صبغة جرام من خلال هياكل جدار الخلية المختلفة. الميكروبات موجبة الجرام لها جدار خلوي أكثر سمكًا ، بينما يكون الجدار الموجود في الميكروبات سالبة الجرام أرق. تحتوي الميكروبات من مجال الأركيا على هياكل جدران خلوية مختلفة عن تلك الموجودة في الميكروبات الموجودة عادة في المختبر (مجال البكتيريا). ومع ذلك ، سيظل لديهم تفاعل صبغة جرام معين ، على الرغم من اختلاف الهياكل الجزيئية الأساسية.

صبغة غرام هي واحدة من أكثر البقع التفاضلية المفيدة في علم الجراثيم ، بما في ذلك علم الجراثيم الطبي التشخيصي. يرتبط تأثير التلوين التفاضلي بالاختلافات في بنية جدار الخلية للكائنات الحية الدقيقة (على الأقل البكتيريا ، ولكن ليس العتائق كما هو مذكور أعلاه). من أجل الحصول على نتائج موثوقة ، من المهم اتخاذ الاحتياطات التالية:

يجب أن تكون الثقافات المراد تلطيخها صغيرة - يتم تحضينها في مرق أو على وسط صلب حتى يصبح النمو مرئيًا (لا يزيد عمرها عن 12 إلى 18 ساعة إن أمكن). تظهر الثقافات القديمة لبعض البكتيريا موجبة الجرام سالبة الجرام. هذا ينطبق بشكل خاص على البكتيريا التي تشكل البويضات ، مثل الأنواع من الجنس عصية. في هذا الفصل ، ستنمو العديد من الثقافات لأكثر من يومين. بالنسبة لمعظم البكتيريا ، هذه ليست مشكلة ، ولكن كن على دراية بأن بعض خصائص تلطيخ الثقافات قد تتغير!

عندما يكون ذلك ممكنًا ، يجب زراعة الثقافات المراد تلطيخها على وسط خالٍ من السكر. تنتج العديد من الكائنات الحية كميات كبيرة من مادة المحفظة أو المادة الوحلية في وجود بعض الكربوهيدرات. قد يتداخل هذا مع إزالة اللون ، وبعض الكائنات الحية سالبة الجرام مثل كليبسيلا قد تظهر كمزيج من الخلايا الوردية والأرجوانية.

إجراء صبغة غرام

يوجد أدناه إجراء يعمل بشكل جيد في المعامل التعليمية.

قم بتغطية الشريحة بصبغة كريستال بنفسجية وانتظر دقيقة واحدة.

بعد دقيقة واحدة ، اغسل البقعة (بلطف!) بأقل كمية من ماء الصنبور. استنزف معظم الماء وانتقل إلى الخطوة التالية. قد يكون من المفيد إمساك الشريحة عموديًا ولمس الزاوية السفلية للمنشفة الورقية أو الورق النشاف.

غطي الشريحة بمحلول اليود لمدة دقيقة واحدة. يعمل اليود كمثبت (مثبت) وسيشكل معقدًا مع البنفسجي البلوري ، ويثبته في الخلية.

اشطفه لفترة وجيزة بماء الصنبور.

قم بإمالة الشريحة بالطول فوق الحوض وقم بتطبيق محلول إزالة اللون من الكحول والأسيتون (باتجاه القطرة) بحيث يغسل المحلول فوق الشريحة بأكملها من طرف إلى آخر. يجب معالجة جميع اللطاخات الموجودة على الشريحة بدقة وبشكل متساوٍ في هذا الإجراء. قم بمعالجة العينة بهذه الطريقة لمدة 2-5 ثوانٍ ثم اشطفها على الفور بماء الصنبور. سيؤدي هذا الإجراء إلى إزالة لون الخلايا ذات النوع السلبي الجرام من جدار الخلية ولكن ليس تلك التي تحتوي على نوع إيجابي الجرام من جدار الخلية ، كقاعدة عامة. صفي معظم الماء واستمر في ذلك.

نظرًا لأن الخلايا سالبة الجرام التي تم إزالة لونها تحتاج إلى أن تكون ملطخة حتى تكون مرئية ، قم بتغطية الشريحة بمضاد Safranin لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة.

شطف لفترة وجيزة وصمة عار على الشريحة حتى تجف. سجل كل مزرعة على أنها موجبة الجرام (خلايا أرجوانية) أو سلبية الجرام (خلايا وردية).

يوضح الفيديو أعلاه إجراء صبغة جرام ، بينما يوضح الشكل 3-11 نتائج صبغة جرام للبكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام.

الشكل 3.11. وصمة غرام. صورة مجهرية للبكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام. لاحظ أن تفاعل الجرام يعتمد على بنية جدار الخلية. أ) بكتريا قولونية قضيب شائع سالب الجرام موجود في القولون. ب) المكورات العنقودية البشروية توجد مكورات موجبة الجرام على الجلد. ج) بكتيريا سيريوس العصويه قضيب موجب الجرام موجود في التربة.

3 - 9 بقعة Endospore

خلايا عصية, ديسولفوتوماكولوم و المطثية (والعديد من الأجناس الأخرى الأقل شهرة - انظر دليل بيرجي) ، كاستجابة لقيود المغذيات ، قد تطور الأبواغ الداخلية التي تمتلك مقاومة ملحوظة للحرارة والجفاف والإشعاع والعديد من العوامل الكيميائية. يمكن لكل خلية إنتاج بوغ داخلي واحد فقط. لذلك فهو ليس بوغًا تناسليًا كما يُرى لبعض الكائنات الحية مثل ستربتوميسيس ومعظم القوالب. إن البوغ هو في الأساس خلية متخصصة ، تحتوي على مجموعة كاملة من الحمض النووي والعديد من البروتينات ، ولكن القليل من الماء. يساهم هذا الجفاف في مقاومة الجراثيم ويجعلها خاملة من الناحية الأيضية. يتطور البوغ في وضع مميز (لأنواعه) في الخلية النباتية. في نهاية المطاف ، تتحلل الخلية ، وتطلق بوغًا داخليًا مجانيًا.

إجراء وصمة عار Endospore

تتطلب بقع Endospore الحرارة لدفع البقعة إلى الخلايا. لكي تنجح البقعة الداخلية ، يجب أن تكون درجة حرارة البقعة قريبة من الغليان ولا يمكن أن تجف البقعة. تحدث معظم بقع البويضات الفاشلة بسبب السماح للبقعة بالتبخر تمامًا أثناء العملية.

ضع الشريحة المثبتة بالحرارة فوق حمام مائي بخار وضع قطعة من الورق النشاف على منطقة اللطاخة. يجب أن يغطي الورق النشاف اللطاخة تمامًا ، لكن يجب ألا يبرز بعد حواف الشريحة. إذا كان بارزًا على الحواف ، فسوف تتدفق البقعة على حافة الشريحة بفعل الشعيرات الدموية وتسبب الفوضى.

تشبع ورقة النشاف بمحلول 5-6٪ من الملكيت الأخضر. اسمح للبخار بتسخين الشريحة لمدة خمس دقائق ، وأعد ملء البقعة إذا بدا أنها تجف.

تبرد الشريحة لدرجة حرارة الغرفة. اشطفها جيدًا وبعناية بماء الصنبور.

ضع الزعفران لمدة دقيقة واحدة. اشطفها جيدًا ولكن لفترة وجيزة بماء الصنبور ، ثم جففها ثم جففها وافحصها. تصبغ الأبواغ الناضجة باللون الأخضر سواء كانت حرة أو في الخلية النباتية. تلون الخلايا النباتية اللون الوردي إلى الأحمر.

يوضح الفيديو أعلاه بقعة باطن الأبواغ

يوضح الشكل 3-12 صورة مجهرية لصبغة endospore.

الشكل 3.12. بقعة Endospore. صورة مجهرية لطخة enodspore. تظهر الأبواغ في الصورة باللون الأخضر ، بينما تلطخ الخلايا النباتية باللون الأحمر. أ) المكورات العنقودية البشروية التي لا تشكل الإندوسبورات. ب) قضيب تشكيل endospore ، بكتيريا سيريوس العصويه.

3 - 11 تمرين التلوين

في دراسة وتحديد البكتيريا ، لا غنى عن المجهر! تم تصميم سلسلة الملاحظات الدقيقة في هذا التمرين لتوضيح كيف يمكن رؤية البكتيريا بشكل فردي في شكلها الأساسي ، الخلية. تتطابق الفترتان الثانية والثالثة هنا مع تلك الموجودة في التجربة 1 حيث يتم فحص الكائنات الحية المعزولة بواسطة الطالب مجهريًا (ويمكن أن تكون أكثر إثارة للاهتمام من تلك المتوفرة في هذا التمرين!).

الفترة 1

المواد

ضخ القش ومختلف العناصر الأخرى من الطبيعة

انزلق مع مسحات من بكتيريا سيريوس العصويه و المكورات العنقودية البشروية

وصمة عار بسيطة.

  1. يتم تزويدك بشريحة مجهر ذات مسحتين. باتباع إرشادات الفحص المجهري والتلطيخ ، قم بإصلاح الشريحة بالحرارة ، مع التأكد من أن الشريحة تمر عبر جانب مسحة اللهب لأعلى.
  2. القفازات متاحة لإجراء التلوين. ضع الشريحة على رف التلوين في الحوض ، وقم بتغطية الشريحة بالبنفسجي الكريستالي لمدة دقيقة واحدة. للمراجعة ، انظر إلى إرشادات البقعة البسيطة.
  3. اشطف الصبغة بحرص بماء الصنبور وجفف الشريحة بمنشفة ورقية أو ورق نشاف.
  4. بكلتا يديك ، احصل على مجهر الضوء من الخزانة (المقابل لرقم مكتبك). هذا هو نوع المجهر الذي سنستخدمه دائمًا لمراقبة المسحات الملطخة.
  5. ما لم يكن للمدرس اتجاهات أخرى تنطبق بشكل مباشر على المجهر الذي تستخدمه ، استخدم الإجراء البسيط الموضح في إجراء التشغيل. ارجع إلى هذا الإجراء أثناء دراسة الخلايا في اللقطتين في الخطوات التالية.
  6. ضع الشريحة على المسرح بحيث تكون موجهة كما هو موضح أعلاه. تأكد من أن المقاطع الموجودة على المسرح تمسك الشريحة بإحكام.
  7. ابدأ ملاحظاتك بـ بكتيريا سيريوس العصويه مسحة. (انظر الشكل أدناه) عند مراقبة هذا الكائن بهدف الغمر بالزيت ، ستلاحظ أن الخلايا كبيرة نسبيًا وذات شكل قضيب (عصيات) وعادة ما تكون في سلاسل. سجل ملاحظاتك في الصفحة التالية.
  8. كرر هذا الإجراء مع مسحة البشرة العنقودية. خلايا هذا الكائن الحي هي كرات (cocci) التي عادة ما يتم ترتيبها في مجموعات (المكورات العنقودية) وأزواج.
  9. عند الانتهاء ، تأكد من وضع المجهر بعيدًا بشكل صحيح (على سبيل المثال ، تم مسح كل الزيت ، ووضع عدسة موضوعية 10x في مكانها ، وتمركز المرحلة). من المستحسن أن تحتفظ بالشريحة. (لإزالة الزيت الغاطس من اللطاخات ، ضع بضع قطع من ورق العدسة على الشريحة لامتصاص الزيت. ثم أضف عدة قطرات من زيلول إلى ورق العدسة. قشر الورقة ، بعد غمرها الآن بمادة زيلول ، من الشريحة. زيلول هو قابل للاشتعال! احفظه بعيدًا عن النيران!)

الشكل 3.13. وصمة عار بسيطة. بقعة بسيطة من S. البشرة و B. cereus. S. البشرة (أ)، B. cereus قديم (ب) ، B. cereus يونغ (ج)

جبل الرطب

  1. لمراقبة الكائنات الحية الدقيقة ، تتوفر عينات مختلفة بما في ذلك ضخ القش. لدراسة الكائنات الحية الدقيقة في المواد المائية المتاحة ، من الضروري عمل حوامل رطبة. الإجراء بسيط نسبيًا:
  2. باستخدام ماصة شعيرية أو حلقة التلقيح ، التقط بعض المواد من حول أسطح العشب والأوراق ومن قاع العينة. ضع قطرة من مادة معلقة على شريحة مجهر نظيفة.
  3. باستخدام عود أسنان ، انشر طبقة رقيقة جدًا من الفازلين على جزء صغير من راحة يدك. خذ غطاءًا نظيفًا (ممسكًا دائمًا بالحواف) وقم بكشط الحواف الأربعة برفق على طول راحة يدك ، والتقط خطًا رفيعًا من الفازلين على طول كل حافة.
  4. ضع الغطاء مباشرة على القطرة الموجودة على الشريحة بطريقة تجعل بعض فقاعات الهواء محاصرة. ضع قطعة صغيرة من منشفة ورقية متعددة الطبقات فوق الغطاء واضغط لأسفل. تخلص من قطعة المناديل الورقية في المطهر.
  5. افحص الحامل المبلل باستخدام مجهر الضوء أو مجهر التباين الطوري الذي أعده المدرب في محطة خاصة في الجزء الخلفي أو الجانبي من المختبر.
  6. دون إزالة ساترة ، تجاهل الشريحة في حاوية المطهر على المسرح. (راجع الصفحة 8 للحصول على إرشادات التنظيف.)

إذا لم تكن قد قمت بذلك بالفعل ، فإن الشكل 1-2 يعرض فيلمًا عن أنواع أشكال الحياة الموجودة في منقوع القش.

الفترة 2

المواد

تنمو المزارع البكتيرية إما في وسط سائل (حساء القلب) أو على منحدر من وسط متعدد الأغراض يتبعه معلق في محلول ملحي:

الإشريكية القولونية - الثقافة الفتية ، المحتضنة 12-15 ساعة

بكتيريا سيريوس العصويه - الثقافة الفتية ، المحتضنة 12-15 ساعة

بكتيريا سيريوس العصويه - حضانة قديمة من 2-3 أيام

الشكل 3.14. بقع غرام. بقع غرام لأنواع مظاهرة. فيما يلي تظهر تفاعلات صبغة جرام النموذجية لنوعين. بكتريا قولونية (أ)، B. cereus قديم (ب) ، B. cereus الشباب (ج). الصور أكبر قليلاً مما يمكن رؤيته في المجهر الضوئي لتحسين الوضوح.

  1. على شريحة زجاجية واحدة نظيفة ، قم بإعداد مسحات من الثقافات الثلاث. انتقل إلى الإعداد المسبق للمسحة إذا كنت بحاجة إلى تنشيط. فقط عندما يكون للمسحات جافة تماما يجب أن تكون الشريحة ثابتة بالحرارة.
  2. نفذ إجراء صبغة غرام كما هو موضح.
  3. كما هو الحال مع أي مسحة ملطخة ، يتم إجراء ملاحظات نهائية باستخدام هدف الغمر بالزيت 100X. ارجع إلى توجيهات المجهر المقدمة بالفعل ، تذكر أن تركز الشريحة في البداية على هدف 10x ، ثم الانتقال إلى هدف الغمر بالزيت.
  4. ضع في اعتبارك أن ثقافات الشباب B. cereus و بكتريا قولونية هي ثقافتك الضابطة الإيجابية والسلبية ، على التوالي ، لملاحظة التباين الجرام المحتمل لكبار السن B. cereus حضاره.
  5. باستخدام الأشكال أدناه ، سجل ملاحظاتك في دفتر ملاحظاتك ، مع ملاحظة تفاعل الجرام (إيجابي إذا كان أرجوانيًا ، وسلبيًا إذا كان أحمر) والشكل الخلوي. هل هناك فرق بين ثقافتي بكتيريا سيريوس العصويه؟ هل تباين الجرام واضح للثقافة القديمة؟ تذكر من مقدمة التجربة 1 أنه يمكننا الرجوع إلى الثقافات القديمة والشابة ولكن لا ينبغي أن نفعل ذلك للخلايا الفردية. (تذكر أن تتخلص من الأنابيب والشرائح بشكل صحيح)

الفترة 3

المواد

سيتم إجراء هذه التجربة في الفصل.

الثقافات البكتيرية الشابة تنمو على شقوق آجار تسريب القلب:

المكورات العنقودية البشروية

تألق الزائفة

سجل رقمك المجهول!

الشكل 3.15. ردود الفعل النموذجية لسلالات المثال للاختبار. تفاعلات غرام الكلاسيكية لـ المكورات العنقودية البشروية (أ) و تألق الزائفة (ب). من هذا ، حدد ما إذا كانت جرامًا (+) أو جرامًا (-). لاحظ أننا لا نظهر مجهول لأن هذا يجب أن يتم في الفصل. الصور أكبر قليلاً مما يمكن رؤيته في المجهر الضوئي لتحسين الوضوح.

  1. على شريحة زجاجية نظيفة ، قم بإعداد مسحات ثابتة بالحرارة للثقافات الثلاث ، مع ملاحظة أن هذه الثقافات تنمو على وسط صلب. لذلك يجب تشتيت الخلايا في قطرة ماء عند تحضير اللطاخة ، حيث أن اللطاخة هي دائمًا تعليق جاف للخلايا. احرص على عدم جعل المسحات كثيفة للغاية! S. البشرة و المتألقة P. هي ثقافتي التحكم الإيجابية والسلبية (على التوالي) لمجهولك.
  2. قم بتنفيذ إجراء صبغة جرام ولاحظ تفاعل الجرام والشكل الخلوي. سجل نتائجك. املأ وصفك لـ unkonwn. احفظ شريحتك حتى يتم إرجاعك المجهول الذي تم تقديره.

الفترة 4

المواد

36-48 ساعة ثقافة الكلبسيلة الرئوية ينمو على منحدر من EMB Agar (وسط عالي السكر)

زجاجة قطارة من الحبر الهندي المصفى

3 أيام ثقافة المتفطرة اللطخة ينمو على مائل من Trypticase Soy Agar بالإضافة إلى 1 ٪ الجلسرين

18-24 ساعة ثقافة ميكروكوكس لوتس (ثقافة التحكم السلبية) تنمو في حساء المغذيات

زجاجات قطارة من carbol fuchsin (طازجة) والكحول الحمضي والأزرق الميثيلين

صبغة الكبسولة

الشكل 3.16. بقعة الكبسولة. بقعة كبسولة باستخدام الحبر الهندي بمعدل تكبير 1000 مرة. خلايا الكلبسيلة الرئويةمحاطة بخلفية مظلمة. الكبسولة هي المنطقة الصافية المحيطة بالخلايا. يتم تكبير الصور المجهرية قليلاً من أجل الوضوح.

  1. باستخدام ثقافة الكلبسيلة الرئوية، ضع حلقة واحدة من الماء على شريحة واستحلب فيها القليل من النمو من الميل أو ثقافة الصفيحة للكائن الحي المحدد. أضف قطرة من حبر الهند المصفى إلى تعليق الخلية. غالبًا ما يكون من المفيد وضع قطرة الحبر الهندي بجوار تعليق الخلية على الشريحة الزجاجية.
  2. احصل على غطاء نظيف (بدون بصمات أصابع ، أو بقع ، أو أوساخ ، وما إلى ذلك) وقم بإزالته برفق باستخدام الفازلين ، ويمكن كشط الفازلين برفق من طبقة رقيقة مطبقة على راحة اليد. ضع قطعة صغيرة متعددة الطبقات (حوالي 1-2 سم 2) من منشفة ورقية فوق الغطاء واضغط لأسفل بقوة وتخلص من المنشفة الورقية في المطهر.
  3. باستخدام مجهر الضوء العادي ، ركز مبدئيًا على الهدف 10x ، وقم بالتبديل إلى هدف 45X ثم - إذا لزم الأمر - هدف 100X ، الغمر بالزيت. اضبط شدة الضوء كما هو مطلوب باستخدام غشاء القزحية. يمكن رؤية مخطط الخلية داخل منطقة الكبسولة الشفافة.
  4. بدلاً من ذلك ، يمكن استخدام مجهر الطور. انتبه إلى الاحتياطات المتعلقة باستخدام هذا المجهر. يمكن إجراء ملاحظات ممتازة باستخدام العدسة الشيئية 40X (التي لا تستهلك الزيت الغاطس).
  5. عند الانتهاء ، دون إزالة ساترة ، تجاهل الشريحة مباشرة في المطهر. لا تتخلص أبدًا من بقع الكبسولة وغيرها من التركيبات المبللة التي تحتوي على اللطاخات الملطخة ، حيث لا تزال الخلايا القابلة للحياة موجودة ويجب تطهير الشرائح!. سجل ملاحظاتك أدناه.
وصمة عار حامض

الشكل 3.17. وصمة عار الحمضية. صورة مجهرية من المتفطرة اللطخة (وردي) و ميكروكوكس لوتس (أزرق) بتكبير 1000x. M. smegmatis سريع الحموضة ، ويحتفظ بصبغة الكاربول الفوشين ، وبالتالي يظهر باللون الوردي. M. luteus ليس صامدًا للحمض ، ويفقد carbol fuchsin أثناء decolorizaiton ، ويقاوم البقع مع الميثيلين الأزرق.

  1. تحضير مسحة مختلطة من كائنين كالتالي: ضع قطرة من ميكروكوكس لوتس ثقافة مرق على شريحة. في هذه القطرة ، أضف خلايا من المتفطرة اللطخة حضاره. تفريق الخلايا بقدر ما تستطيع ( المتفطرة تميل الخلايا إلى التكتل) ، وتحضير مسحة بحجم النيكل. اتركه يجف تمامًا في الهواء ، ثم قم بإصلاحه بالحرارة جيدًا ، وقم بتمرير الشريحة عبر اللهب مرة أو مرتين إضافية.
  2. قم بتنفيذ الإجراء الصامد للحموضة (صفحة 148 ، مراقبة الشريحة باستخدام مجهر الضوء العادي) وسجل ملاحظاتك أدناه.
  3. كما هو الحال مع جميع اللطاخات الملطخة ، تخلص من الشريحة في الحاوية المناسبة.

3-12 ملخص الفحص المجهري والتلوين

غالبًا ما يكون تلطيخ الميكروبات وعرضها تحت المجهر ضروريًا لتحديدها وتصنيفها. يمكن أن تساعد هوية الميكروب في تحديد سبب المرض أو مصدر تلف الطعام. تلعب المجاهر أيضًا أدوارًا مهمة في علم الوراثة وبنية الخلية والكيمياء الحيوية والعديد من التخصصات العلمية الأخرى. نأمل أن تساعدك هذه المقدمة القصيرة على فهم تصور الكائنات الحية الدقيقة.


أنواع المجاهر الضوئية

إن أفضل مجهر المجال الساطع معروف للطلاب ومن المرجح العثور عليه في الفصل الدراسي. قد تحتوي الفصول الدراسية والمختبرات المجهزة بشكل أفضل على مجال مظلم و / أو بصريات تباين طوري. تباين التداخل التفاضلي ، Nomarski ، تباين وتباين تعديل Hoffman ينتج عنه عمق كبير من الدقة وتأثير ثلاثي الأبعاد. المجاهر الفلورية والمتحد البؤر هي أدوات متخصصة ، تستخدم للبحث والتطبيقات السريرية والصناعية.

بخلاف المجهر المركب ، يمكن أيضًا العثور على أداة أبسط لاستخدام التكبير المنخفض في المختبر. عادةً ما يحتوي مجهر الاستريو أو مجهر التشريح على أنبوب عيني ثنائي العين ومسافة عمل طويلة ومجموعة من التكبيرات عادةً من 5x إلى 35 أو 40x. توفر بعض الأدوات عدسات لتكبير أعلى ، لكن لا يوجد تحسن في الدقة. نادرًا ما يكون هذا & quot التكبير الكاذب & quot يستحق المصاريف.


أفكار لمناقشة المظاهرات في الفصل

تتمتع جزيئات الماء بجاذبية متبادلة قوية لبعضها البعض ، مما يمكّن جزيئات الماء من التماسك بقوة. الماء والزجاج لهما قوة جذب أصغر ، تسمى الالتصاق بدلاً من التماسك لتمييز القوى بين الجزيئات بين جسمين منفصلين (الزجاج الذي يجذب الماء) عن تلك التي تجذب الماء. يؤدي الالتصاق بين الماء والزجاج إلى ارتفاع الشعيرات الدموية في أنبوب زجاجي. القوة المتماسكة لجزيئات الماء مسؤولة عن ظاهرة التوتر السطحي.


شاهد الفيديو: جواب سؤالكم: كيف ننظف المجهر وعدسات المجهر (شهر فبراير 2023).