معلومة

فحوصات مصلية تقيس استجابة الجسم المضاد

فحوصات مصلية تقيس استجابة الجسم المضاد


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

بالنظر إلى أن الاستجابة المناعية المناسبة للبكتيريا قد يتم إحباطها لدى الفرد ، بما في ذلك عدم إنتاج جميع الأجسام المضادة المعروف أنها تحدث لدى الأشخاص المصابين ، أو إنتاج كميات غير كافية من الأجسام المضادة الخاصة بالبكتيريا - هل جميعها الاختبارات المصلية باستخدام الأجسام المضادة كأساس للكشف عن عدوى جهازية معيبة بطبيعتها؟ في هذه الحالة ، أفترض التطبيق المناسب للاختبار ومنهجية المختبر المختصة. ولكن ، بنفس القدر من الأهمية ، ما هي المعايير التي يمكن استخدامها بشكل روتيني للنظر في فعالية اختبار معين للأجسام المضادة ، في جميع المجالات.


يتم إجراء الأجسام المضادة المستخدمة في الاختبارات المصلية في المختبر ، ولا يلزم أن تكون فعالة في القضاء على العامل الممرض. بالنسبة للفرد المصاب ، قد تلعب الأجسام المضادة دورًا في تحييد أو طمس أو تنشيط النظام التكميلي (راجع علم الأحياء المناعي لـ Janeway لمزيد من التفاصيل). هناك عدد من الأسباب التي تجعل الأجسام المضادة موجودة ولا تؤدي إلى استجابة فعالة في هذه المسارات.

على سبيل المثال ، ينتج بكتيريا E. Coli O157: H7 ذيفان الشيغا وتوجد مقايسات مناعية لاختبار وجود السم في البراز (1). لا يلزم سوى كميات قليلة من السم لإحداث المرض. شوهدت الأجسام المضادة ضد السم في الأفراد المصابين بالمرض ، مما يشير إلى أن السم ليس تحديًا قويًا بما يكفي لاستجابة مناعية مناقشة (2).

يمكنك مراجعة كل حالة على حدة لكل من المقايسات المناعية ومعرفة سبب صعوبة تحويل أهدافها إلى علاجات.


هل جميع الاختبارات المصلية التي تستخدم الأجسام المضادة كأساس للكشف عن عدوى جهازية معيبة بطبيعتها؟

لا

يجب تفسير كل اختبار تشخيصي في سياق السمات السريرية للفرد ووفقًا للبيانات المتعلقة بهذا الاختبار المعين. لا تختلف اختبارات المصل للأجسام المضادة. انظر Cecil Medicine الفصلين 8 و 9 لمناقشة هذا. ممر رئيسي:

لا تقدم معظم الاختبارات إجابة محددة حول التشخيص أو التكهن ، ولكنها تقلل من عدم اليقين بدلاً من ذلك

باستثناء حالات التمنيع السلبي (على سبيل المثال ، IVIG المنقول) ، يشير وجود جسم مضاد معين في عينة مصل إلى التعرض لمستضد واستجابة مناعية. ما يعنيه هذا بالضبط يعتمد على الفرد والاختبار. على الرغم من أنه ليس بشكل عام الاختبار المفضل لتشخيص العدوى النشطة أو المزمنة، تعتبر بعض اختبارات الأجسام المضادة مؤشرات ممتازة للإصابة بالعدوى لدى العديد من الأفراد. من الأمثلة الجيدة على ذلك الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية.

كما هو الحال مع أي اختبار تشخيصي (مرة أخرى ، انظر Cecil) ، تم تقييم الجسم المضاد لفيروس نقص المناعة البشرية بالنسبة للمعيار ، مما يمنحنا حساسية (مدى جودة الاختبار في اكتشاف المرض عندما يكون موجودًا) والنوعية (مدى جودة الاختبار في الاستبعاد المرض عندما لا يكون موجودًا). إنه ليس مثاليًا (لقد رأيت واحدة إيجابية زائفة في حياتي المهنية) ، وهي ليست مفيدة في الأسابيع القليلة الأولى بعد التعرض ، لكنها بشكل عام اختبار تشخيصي ممتاز.

تُستخدم اختبارات الأجسام المضادة في العديد من الأشياء الأخرى ، ومرة ​​أخرى ، كما هو الحال مع أي اختبار تشخيصي ، يتم تقييمها لهذا الغرض. بالتمسك باستخدام هذه الاختبارات في الأمراض المعدية ، تعد اختبارات الأجسام المضادة لالتهاب الكبد B مثالًا مثيرًا للاهتمام ، نظرًا لأن الأجسام المضادة لمستضدات مختلفة تعني أشياء مختلفة. يشير الجسم المضاد السطحي ، على سبيل المثال ، إلى المناعة إما من التعرض والتصفية أو من التحصين. يشير الجسم المضاد الأساسي إلى التعرض للفيروس نفسه ، لأن المستضد الأساسي غير موجود في اللقاح. كما هو الحال مع معظم اختبارات الأجسام المضادة ، يمكن أن تعطيك فئة الجسم المضاد أيضًا معلومات مفيدة. تمثل الأجسام المضادة IgM عادةً الاستجابة المناعية الأولية ، حيث تمثل الأجسام المضادة IgG استجابة لاحقة ، وإما إزالة أو عدوى مزمنة.


هل جميع الاختبارات المصلية التي تستخدم الأجسام المضادة كأساس للكشف عن عدوى جهازية معيبة بطبيعتها؟

أنت تفكر نظريًا. المقايسات المصلية ليست نظرية ، إنها تجريبية.

عندما يتم توصيف أي مقايسة ، سيتم ربطها بنتيجة معينة. المقايسات المصلية لا تختلف. طالما أن هناك علاقة قوية مع الظاهرة المستهدفة ، فلا يهم ما إذا كانت "معيبة" نظريًا (مهما كان معنى ذلك) ؛ إذا أخبروك بما تحتاج إلى معرفته ، فإنهم يعملون.

إذا كانت قراءة الفحص المصلي 40 أو أعلى في كل مرة ، يمكن إثبات إصابة الفرد ، وفي كل مرة يكون فيها أقل من 40 ، لا يكون الفرد محميًا ، فلا يهم المشكلات النظرية التي قد تكون موجودة في الفحص ، يمكن استخدامها للتنبؤ بالعدوى. في هذا الصدد ، إذا كانت كل مرة يبكي فيها قديس خزفي من الملح يرتبط بالعدوى ، فسيكون اختبار القديس صالحًا تمامًا في العيادة ، بغض النظر عن مدى خلل النظرية.

كيف تربط مقايستك بوجود عدوى ، أو أي شيء آخر؟ عادةً ما تكون هناك اختبارات ذات معايير ذهبية قد تستغرق وقتًا طويلاً أو صعبة أو مكلفة للتشغيل بشكل روتيني ، وسيتم الرجوع إلى الفحص المصلي للتحقق من صحته ، ثم نأمل الموافقة عليه من قبل أي هيئة تنظيمية مسؤولة ( في الولايات المتحدة ، غالبًا إدارة الأغذية والعقاقير).

لا تخلط بين الأسباب النظرية والاعتبارات العملية.


من علم الأمصال المتعدد إلى السيرولوميات - نهج جديد لاستجابة الجسم المضاد ضد بروتين SARS-CoV-2

يستلزم وباء SARS-CoV-2 المستجد حاجة ملحة لإجراء فحوصات مصلية محددة وحساسة عالية الإنتاجية لتقييم وبائيات SARS-CoV-2. لذلك ، نهدف إلى تطوير مقايسة مصلية متعددة الإرسال تعتمد على حبة الفلورسنت SARS-CoV-2 للكشف عن استجابات الجسم المضاد لبروتين SARS-CoV-2. تم التعبير عن بروتينات بروتين SARS-CoV-2 والبروتين N الخاص بـ SARS-CoV-1 وفيروسات كورونا الباردة الشائعة (ccCoVs) بشكل متجانس في بكتريا قولونية أو خلايا HEK293. تم تقييم أداء الفحص في مجموعة حالات COVID-19 (ن = 48 مريضا في المستشفى من هايدلبرغ) وكذلك ن = 85 ضوابط ما قبل الجائحة مطابقة للعمر والجنس من دراسة استير. تضمن التحقق من صحة الفحص مقارنة مع التألق المناعي محلي الصنع ومقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم التجاري (ELISA). تم تحقيق حساسية 100٪ (95٪ CI: 86-100٪) في مرضى COVID-19 بعد 14 يومًا من ظهور الأعراض مع إيجابية مصلية مزدوجة لـ SARS-CoV-2 N ومجال ربط مستقبلات بروتين سبايك. كانت الخصوصية التي تم الحصول عليها باستخدام هذه الخوارزمية 100٪ (95٪ CI: 96-100٪). كانت استجابات الجسم المضاد لـ ccCoVs N عالية بشكل كبير ولا ترتبط مع تلك الخاصة بـ SARS-CoV-2 N. تحليلات استكشافية فيما يتعلق بتطور المرض ومسار استجابة الجسم المضاد. حقق هذا الاختبار المصلي متعدد الإرسال لـ SARS-CoV-2 الذي تم تطويره حديثًا حساسية وخصوصية عالية لتحديد الإيجابية المصلية لـ SARS-CoV-2. تسمح قدرته الإنتاجية العالية بإجراء بحث وبائي حول SARS-CoV-2 في الدراسات السكانية الكبيرة. سيسمح إدراج مسببات الأمراض الإضافية في اللوحة بالإضافة إلى التقييم المنفصل للأنماط المتماثلة للغلوبولين المناعي (Ig) بمعالجة الأسئلة البحثية التي تتجاوز الانتشار المصلي لـ SARS-CoV-2.

الكلمات الدالة: الأمصال المتعددة لـ SARS-CoV-2.

بيان تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

الأرقام

رسم تخطيطي للدراسة. حالات COVID-19 ...

رسم تخطيطي للدراسة. تم تجنيد حالات COVID-19 في عيادات جامعة هايدلبرغ بين مارس ...

استجابات الجسم المضاد لبروتينات SARS-CoV-2 ...

استجابات الجسم المضاد لبروتينات SARS-CoV-2 في ن = 85 ضوابط ما قبل الجائحة و ن…

استجابات الجسم المضاد لبروتينات SARS-CoV-2 ...

استجابات الجسم المضاد لبروتينات SARS-CoV-2 N و S1 و S2 والأجزاء الفرعية الخاصة بها (N-EP3 ، ...


قياس استجابة الجسم المضاد لـ SARS-CoV-2

نظرًا لانتشار لقاحات SARS-CoV-2 في جميع أنحاء العالم ، من المهم بشكل متزايد للأطباء أن يكونوا قادرين على قياس الاستجابة المناعية للجسم بمرور الوقت ، لفهم مدى فعالية الحماية ومدة استمرارها. تلعب اختبارات الأجسام المضادة دورًا حيويًا في مكافحة COVID-19 ، مما يساعد على تأكيد وقياس استجابة الجسم المضاد بعد العدوى أو التطعيم.

لمعرفة المزيد حول طرق استخدام اختبارات الأجسام المضادة في الجائحة ، شبكات التكنولوجيا تحدثت إلى هيذر-ريد هاربر ، المدير الأوروبي الأول للمقايسة المناعية والكيمياء السريرية في بيكمان كولتر. سلطت هيذر الضوء أيضًا على مزايا اختبارات الأجسام المضادة الكمية وناقشت سبب أهمية اكتشاف كل من IgG و IgM.

آنا ماكدونالد (AM): هل يمكنك شرح بعض الأدوار التي تلعبها اختبارات الأجسام المضادة في مكافحة COVID-19؟

هيذر ريد-هاربر (صاحب السمو الملكي):
تخبرنا اختبارات الأجسام المضادة ، المعروفة أيضًا باسم اختبارات الأمصال ، بمراحل الحالة المناعية للفرد والبحث عن وجود الأجسام المضادة. هناك نوعان من الأجسام المضادة التي يتم قياسها عادةً في الدم: الأجسام المضادة IgM ، بشكل عام ، هي خط دفاع الجسم الأول ضد الفيروس ، بينما تقدم الأجسام المضادة IgG استجابة مناعية أكثر استدامة للفيروس.

تلعب اختبارات الأجسام المضادة دورًا مهمًا في فهم مستوى المناعة التي طورها الفرد ضد فيروس SARS-CoV-2. يمكن أن يساعد هذا النوع من الفهم في تحديد الأشخاص الأكثر عرضة للإصابة بالعدوى وأولئك الذين أصيبوا سابقًا ويمكنهم العودة بأمان إلى العمل أو الجامعة ، على سبيل المثال.

يمكن أن يوفر الاختبار على نطاق واسع أيضًا نظرة عامة على حالة مناعة السكان ويحتمل أن يساعد في توجيه الإدارة المستقبلية لهذا الفيروس.

مع برامج اللقاح الجارية بشكل جيد ، فإن هذه الاختبارات لديها القدرة على لعب دور حيوي في فهم الاستجابة المناعية للفرد للقاح مع مرور الوقت ومدة الحفاظ على المناعة.

صباحا: ما هي مزايا الكشف عن كل نوع من الأجسام المضادة؟

سمو:
في الأيام القليلة الأولى بعد الإصابة يمكن اكتشاف الفيروس فقط. هذا عندما يتكاثر وينتقل بسهولة إلى الآخرين. في هذه المرحلة ، يمكن استخدام الاختبارات القائمة على PCR التشخيصية الجزيئية واختبارات المستضد للكشف عن الفيروس. ثم يبدأ الجهاز المناعي للفرد في الاستجابة للحمل الفيروسي كجزء من المرحلة الحادة من العدوى. يحدث هذا عندما يتم إنتاج وزيادة الأجسام المضادة IgM لمكافحة الفيروس ويمكن استخدامها لتحديد المرضى الذين يعانون من عدوى أحدث. بعد حوالي أسبوع ، يتم الوصول إلى مرحلة النقاهة من الإصابة وينتج IgG ويزداد ، بينما يبدأ IgM في الانخفاض. ومع ذلك ، فإن الوقت المستغرق يختلف من استجابة فرد إلى آخر.

باتباع مبادئ العدوى هذه ، يمكننا استخدام كل من مقايسات IgM و IgG لفهم حالة المناعة ومرحلة العدوى لدى الفرد ، على الرغم من أنه يُعتقد أن IgG يوفر المناعة اللازمة لتقليل تأثير العدوى في المستقبل.

صباحا: أطلق Beckman Coulter مؤخرًا اختبار Access SARS-CoV-2 IgG II للأجسام المضادة. هل يمكنك تقديم لمحة عامة عن كيفية عمل الاختبار؟

سمو:
يقيس اختبار Access SARS-CoV-2 IgG II الأجسام المضادة IgG الموجهة إلى مجال ربط المستقبلات لبروتين سبايك لفيروس كورونا استجابةً لعدوى سابقة. يستخدم مستضدات الفيروسات المعطلة على الجسيمات المغناطيسية لالتقاط الأجسام المضادة IgG من عينات المرضى والكشف عنها باستخدام الأجسام المضادة الموصوفة المضادة لـ IgG.

ثم يوفر الاختبار نتيجة عددية تتراوح من 2.00-450 AU / mL بالإضافة إلى نتيجة نوعية للأجسام المضادة لـ SARS-CoV-2 IgG. الاختبار له خصوصية مؤكدة بنسبة 99.9٪ وحساسية 98.9٪ بعد 15-60 يومًا من ظهور الأعراض. يمكن استخدام مقايسة Access SARS-CoV-2 IgG II في وضع الوصول العشوائي (RAM) ودمجها بسلاسة في تدفقات العمل الحالية دون معالجة الدُفعات. يمكن أيضًا استخدام الاختبار مع مجموعة متنوعة من أجهزة تحليل Beckman Coulter ، بما في ذلك DxI 800 عالي الإنتاجية المصمم للمختبرات الكبيرة ، و DxI 600 للمختبرات متوسطة الحجم ومحللات Access 2 للمختبرات الأصغر وعيادات الرعاية الصحية.

صباحا: لماذا تم توجيه الأجسام المضادة IgG إلى مجال ربط مستقبلات بروتين سبايك المختار كهدف؟

سمو:
يحتوي الفيروس التاجي على أربعة أنواع من البروتين: الغشاء ، والمغلف ، والنيوكليوكابسيد ، والسنبلة. إنه بروتين سبايك وهو البروتين السطحي الرئيسي لفيروس كورونا ويتوسط الدخول إلى الخلايا المضيفة. يرتبط مجال ربط المستقبلات (RBD) لبروتين السنبلة بقوة بمستقبل في خلايا الجهاز التنفسي يسمى الإنزيم المحول للأنجيوتنسين 2 ، أو ACE2. ACE2 هو مستقبل دخول الخلية البشرية وبمجرد أن يندمج غشاء الخلية الفيروسية مع غشاء الخلية البشرية ، يدخل جينوم الفيروس إلى الخلايا البشرية ويبدأ العدوى.

يُعتقد أن الأجسام المضادة IgG التي ترتبط بـ RBD لبروتين السنبلة قد تكون مفتاحًا لفهم الاستجابة المناعية للفيروس و في المختبر أظهرت الدراسات أن وجود هذه الأجسام المضادة قد يشير إلى تحييد عدوى SARS-CoV-2 ويجعل الفيروس غير قادر على إصابة الخلايا.

يتم توجيه كل من مقايستي Beckman Coulter SARS CoV-2 IgM و IgG II إلى مجال ربط مستقبلات البروتين السنبلة ، من أجل اكتشاف الأجسام المضادة التي يحتمل أن تكون واقية.

صباحا: ما هي مزايا الاختبار الكمي للأجسام المضادة؟

سمو:
كانت العديد من الاختبارات المصلية المتاحة في بداية هذا الوباء ذات طبيعة نوعية. هذا يعني أنه تم إنشاء نتيجة إيجابية أو سلبية فقط. لذلك ، قدمت النتائج فقط معلومات للأطباء حول ما إذا كان المريض قد تعرض للفيروس. لم تعط النتيجة صورة واضحة عن الاستجابة المناعية بمرور الوقت.

تقدم الاختبارات الكمية قيمة عددية يمكنها تحديد مستوى الأجسام المضادة في الدم. تسمح فحوصات مثل SARS CoV-2 IgG II من Beckman Coulter للأطباء بمراقبة الاتجاهات في مستويات الأجسام المضادة للمريض من خلال إنشاء خط أساسي كمي وبالتالي تقييم التغيير النسبي للاستجابة المناعية للفرد للفيروس بمرور الوقت.

كانت هيذر-ريد هاربر تتحدث إلى آنا ماكدونالد ، كاتبة العلوم لشبكات التكنولوجيا.


أساليب

البيانات وأخذ العينات

لفهم ديناميكيات عدوى الملاريا وتأثير الإدارة الجماعية السنوية للأدوية (MDA) ، أجريت دراسة جماعية مستقبلية من 2013 إلى 2015 في 12 قرية عبر خمس مناطق إدارية - الساحل الغربي (WCR) ، الضفة الشمالية (NBR) ، السفلى. مناطق النهر (LRR) والنهر الأوسط (CRR) وأعلى النهر (URR) - كما وصفها Mwesigwa et al. [13]. المتصورة المنجلية (ص) تم قياس الانتشار بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) من 2.27 إلى 19.60٪ في مناطق النهر الأوسط وأعالي النهر على التوالي (الشكل 1). تم تسجيل السكان الذين تزيد أعمارهم عن 6 أشهر في الدراسة ، وأجريت المسوحات الشهرية خلال موسم انتقال الملاريا من يونيو إلى ديسمبر من كل عام ، خلال موسم الجفاف في أبريل 2014 ، وقبل تنفيذ MDA في مايو ويونيو 2014 و 2015 (الصورة 2). تم جمع عينات دم وخز الإصبع الفردية لتقدير الهيموجلوبين وعلى ورق الترشيح (Whatman 3 Corporation ، Florham Park ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية) للتحليل الجزيئي والمصل. تضمنت حالات الملاريا السريرية الأفراد الذين يعانون من أعراض في المرافق الصحية (مثل الكشف السلبي عن الحالات) أو الأفراد الذين تم تحديدهم في القرى من قبل ممرضات الدراسة الذين لديهم تاريخ من الحمى في 24 ساعة السابقة أو درجة حرارة إبطية 37.5 درجة مئوية واختبار تشخيص سريع إيجابي (RDT) النتيجة (Paracheck ص، نظام الأوركيد الطبي الحيوي ، الهند).

خريطة لديناميات انتقال الملاريا دراسة مع المناطق وقرى الدراسة عن طريق انتشار تفاعل البوليميراز المتسلسل

الجداول الزمنية للدراسة. الجدول الزمني لدراسة ديناميكيات انتقال الملاريا يظهر باللونين الأسود والأخضر. الجدول الزمني للدراسة المصلية موضح باللون الأزرق لمناطق الساحل الغربي وأعالي النهر (إعدادات انتقال منخفضة ومتوسطة ، على التوالي). تم إجراء التحليل المصلي على عينات مأخوذة من مسوحات شهرية لقرية بأكملها في نديمبان وبيس في منطقة الساحل الغربي (أ) ونجيال ومدينة سامكو في منطقة أعالي النهر (ب) ، وعينات طولية من الأفراد الذين لديهم اختبار تشخيصي سريع إيجابي (RDT) أو نتيجة اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أثناء دراسة ديناميكيات انتقال الملاريا. تمت معالجة عينات التحليل المصلي على عينات Luminex MAGPIX من المسوحات الشهرية باستخدام الفحص المجهري واختبارات التشخيص السريع (RDTs) وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)

الدراسة المصلية المقدمة هنا هي مجموعة فرعية من دراسة ديناميكيات انتقال الملاريا وتضمنت جميع العينات المتاحة (ن = 4599) من مجموعة مختارة من المسوحات الشهرية في أربع قرى ، بإجمالي 1795 فردًا (الشكل 2). في منطقة الساحل الغربي (بيس ونديمبان) ، كانت العينات المعالجة للتحليل المصلي مأخوذة من المسوحات التي أجريت في بداية موسم الانتقال في يوليو 2013 (ن = 534) وفي نهاية الموسم في ديسمبر 2013 (ن = 524). في منطقة أعالي النهر (URR) ، شمل التحليل المصلي جميع العينات التي تم جمعها في نجايال ومدينة سامكو في يوليو 2013 (ن = 778) ، ديسمبر 2013 (ن = 628) أبريل (موسم الجفاف) 2014 (ن = 799) وديسمبر 2014 (ن = 737) (الجدول 1). تمثل هذه المناطق أقصى شدة إرسال ، مع اختيار الأشهر في بداية موسم الإرسال ونهايته. تم ربط عينات من حالات PCD الإكلينيكية عن طريق رمز تعريف مشارك في الدراسة بعينات من نفس الأفراد تم جمعها خلال المسوحات الشهرية الروتينية. لتقدير الارتباط بشكل أكبر بين استجابات الجسم المضاد على المستوى الفردي والاستجابات السريرية أو المتزامنة ص تم دمج عينات المسح الشهرية للقرية بأكملها في منطقة الساحل الغربي ومنطقة النهر العليا كما هو موصوف أعلاه مع مجموعة فرعية إضافية من 1244 عينة طولية من 316 فردًا تعرضوا لنتائج اختبار RDT أو PCR إيجابية أو ظهرت عليهم أعراض سريرية في أي وقت. خلال دراسة ديناميكيات انتقال الملاريا (الشكل 2). بالنسبة لهؤلاء الأفراد ، تمت معالجة جميع العينات المتاحة من الدراسة لالتقاط استجاباتهم المصلية طوليًا قبل وبعد نتيجة اختبار RDT أو PCR إيجابية.

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات المشتركة بين حكومة غامبيا ومجلس موارد المهاجرين (SCC1318). تم الحصول على الموافقة اللفظية لأول مرة في اجتماعات التوعية القروية ، تليها الموافقة المستنيرة الفردية المكتوبة لجميع المشاركين. قدم الآباء / الأوصياء موافقة كتابية للأطفال الذين تقل أعمارهم عن 17 عامًا ، وتم الحصول على الموافقة من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 12 و 17 عامًا.

اختيار وتصميم المستضد

تم اختيار المستضدات من شاشة أولية مؤلفة من 856 مرشحًا على مصفوفة دقيقة للبروتين في النسخ والترجمة في المختبر (IVTT) على أساس الارتباط مع عدوى الملاريا لدى الأطفال [11]. تم إنشاء المستضدات والتعبير عنها في الإشريكية القولونية (بكتريا قولونية) كبروتينات اندماج ذات علامات الجلوتاثيون S-ترانسفيراز (GST) [20،21،22] ، باستثناء صأعرب AMA1 في بيتشيا باستوريس كبروتين موسوم بالهيستيدين [15]. تم إجراء تنقية البروتين بواسطة كروماتوجرافيا التقارب (Glutathione Sepharose 4B ، GE Healthcare Life Sciences) أو HisPur Ni-NTA (Invitrogen) للبروتينات التي تحمل علامة GST و His ، على التوالي ، وتركيز وجودة ونقاء إنتاج المستضد الذي تم تقييمه باستخدام Bradford الفحص و SDS-PAGE. المحللة البكتيرية من ثقافة غير محولة بكتريا قولونية تم استخدامه في المخازن المؤقتة للمقايسة للقضاء على تفاعل الخلفية ل بكتريا قولونية البروتينات التي لم تكن خاصة بالملاريا تستهدف البروتينات.

بالإضافة إلى ذلك ، لمراعاة التفاعل المحتمل غير الملاريا ضد بروتينات الاندماج الموسومة بعلامة GST ، تم تضمين حبات مقترنة بـ GST لتحديد استجابات الغلوبولين المناعي (IgG) الخاصة بـ GST وتصحيحها للربط غير المحدد. بعد المعالجة المختبرية ، كان هناك 71 عينة من المشاركين مع استجابات الأجسام المضادة لـ GST أعلى من 1000 متوسط ​​كثافة مضان (MFI) ، والتي تم تعريفها على أنها العتبة للإشارة إلى ارتباط محتمل غير خاص بالملاريا ، وتم استبعادها من التحليلات الإضافية. تم أيضًا تضمين ذوفان الكزاز (TT ، مختبرات ماساتشوستس البيولوجية) كعنصر تحكم إيجابي داخلي ، على افتراض أن الغامبيين المحصنين سيظهرون استجابات الأجسام المضادة لهذا البروتين المستهدف. تم تفصيل ملخص لتركيبات المستضد وظروف الاقتران في الجدول 2.

إجراءات المختبر

تم قياس استجابات الأجسام المضادة الخاصة بالمستضد باستخدام بروتوكول Luminex MAGPIX الموضح في Wu et al. 2019 [23]. تمت إزالة البلازما من 6 مم من بقع الدم المجففة (DBS) (4 ميكرولتر من مكافئ الدم الكامل) ورجها طوال الليل عند درجة حرارة الغرفة في 200 ميكرولتر من محلول شطف البروتين الذي يحتوي على الفوسفات المحلول الملحي (PBS) (الرقم الهيدروجيني 7.2) ، 0.05٪ أزيد الصوديوم ، و 0.05٪ توين -20 ، مما ينتج عنه تخفيف أولي بنسبة 1:50 للعينة. قبل يوم واحد من معالجة الفحص ، تم تخفيف العينات إلى تخفيف نهائي 1: 500 باستخدام 10 ميكرولتر من عينة التخفيف المسبق 1:50 و 90 ميكرولتر من حظر B Buffer لمنع الارتباط غير المحدد (1xPBS ، 0.05٪ Tween ، 0.5 ٪ ألبومين مصل البقر (BSA) ، 0.02٪ أزيد الصوديوم ، 0.1٪ كازين ، 0.5٪ كحول بولي فينيل (PVA) ، 0.5٪ بولي فينيل بيروليدون (PVP) ، 1500 ميكروغرام / مل بكتريا قولونية مقتطف). تم أيضًا حضانة الضوابط السلبية والإيجابية قبل يوم واحد في Buffer B ، مع عناصر تحكم سلبية تم تحضيرها عند تخفيف 1: 500 وضوابط جامبية إيجابية مجمعة في تخفيف متسلسل من 6 نقاط 5 أضعاف (1: 10-1: 31،250). استند التحكم الإيجابي إلى مجموعة من 22 عينة مصل من الأفراد ذوي المناعة المفرطة للملاريا في غامبيا ، واستخدمت عشر عينات بلازما فردية من البالغين الأوروبيين الساذجين للملاريا كعناصر تحكم سلبية.

تم تحضير العينات لتشخيص تفاعل البوليميراز المتسلسل كما وصفه Mwesigwa et al. [13]. باختصار ، تم استخراج الحمض النووي من ثلاثة DBS بحجم 6 مم باستخدام روبوت QIAxtractor الآلي (Qiagen). تم تضمين الضوابط السلبية والإيجابية (3D7) للتحكم في التلوث المتبادل وكفاءة استخراج الحمض النووي ، على التوالي. تم تفكيك DBS عن طريق الحضانة في المخزن المؤقت لهضم الأنسجة عند 60 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة وتم تطبيق الوصلات المهضومة على ألواح الالتقاط ، وغسلها ، وتصفية الحمض النووي إلى 80 ميكرولتر. تم استخدام الحمض النووي المستخرج (4 ميكرولتر) في PCR متداخلة ، مما يضخم النسخة المتعددة المتصورة تسلسل الجينات الريبوسومية RNA باستخدام بادئات محددة للجنس والأنواع [24]. تم تشغيل جميع منتجات PCR باستخدام نظام QIAxcel الكهربائي للشعيرات الدموية (Qiagen) ، باستخدام خرطوشة الفرز وقلم محاذاة 15-1000 زوج قاعدي. تم تصدير النتائج وحصولها على نقاط مزدوجة باستخدام كل من وظيفة التسجيل الثنائي QIAxcel ويدويًا عن طريق تصور صور الهلام وتم تسجيل التناقضات بواسطة قارئ مستقل ثالث. تم تعمية جميع القراء لبيانات مسح المشاركين.

تحاليل احصائية

اعتمد تحليل البيانات على إجمالي مستويات IgG لخمسة مستضدات كواسمات محتملة للوقوع المصل [11] - بروتين الغشاء 5 المنسوخ مسبقًا (Etramp5.Ag1) ، بروتين تصدير الخلايا المشيمية 18 (GEXP18) ، بروتين الصدمة الحرارية 40 (HSP40.Ag1) ، ومستضد ربط كريات الدم الحمراء 175 RIII-V (EBA175) ، ومتماثل البروتين المرتبط بالخلية الشبكية 2 (Rh2.2030). ثلاثة مستضدات مرتبطة باستجابة الجسم المضاد طويلة العمر -المتصورة المنجلية مستضد سطح الميروزويت 1 19-كيلو دالتون منطقة الكاربوكسي الطرفية (صMSP119), المتصورة المنجلية مستضد الغشاء القمي 1 (صAMA1) و المتصورة المنجلية البروتين الغني بالغلوتامات ، المنطقة 2 (صGLURP.R2) - تم تضمينها كمقارنة ، والتي تم استخدامها تاريخيًا لتقييم معدلات التحويل المصلي بمرور الوقت [8 ، 9] كما تمت دراستها سابقًا في غامبيا [6 ، 7]. بالنسبة للمستضدات المرتبطة بالأجسام المضادة طويلة العمر (صMSP119, صAMA1 ، صGLURP.R2) ، الأفراد الذين يقيمون في منطقة موبوءة تعرضت سابقًا للملاريا ، ولكن لم يصابوا بها مؤخرًا ، قد لا يزال لديهم مستويات الأجسام المضادة المتبقية أعلى بكثير من الأفراد الساذجين بالملاريا في المناطق غير الموبوءة. لذلك ، تم استخدام نموذج خليط غاوسي مكون من مكونين لتحديد توزيعات مستويات الأجسام المضادة السلبية والإيجابية ، معبرًا عنها بوحدات كثافة الفلورة المتوسطة (MFI). تم تعريف عتبات الإيجابية المصلية على أنها متوسط ​​قيم سجل MFI بالإضافة إلى انحرافين معياريين للتوزيع السلبي [25]. تم تقدير نماذج المزيج باستخدامعادي"في"mixtoolsالحزمة v1.0.4 في الإصدار R 3.6.1. بالنسبة للمستضدات المرتبطة بالأجسام المضادة قصيرة العمر حيث لم يكن الدليل الإحصائي للتوزيع الثنائي النسبي لاستجابات الأجسام المضادة في المجتمع قوياً بالنظر إلى التحلل السريع لمستويات الأجسام المضادة بعد الإصابة - Etramp5.Ag1 و GEXP18 و HSP40.Ag1 و EBA175 و Rh2 .2030 - تم تحديد عتبة الإيجابية المصلية من خلال متوسط ​​سجل MFI بالإضافة إلى ثلاثة انحرافات معيارية لـ 71 متبرعًا أوروبيًا ساذجًا بالدم يستخدم كعناصر تحكم سلبية.

الارتباط على المستوى الفردي بين استجابة الجسم المضاد والاحتمالات المتزامنة للملاريا السريرية (يتم اكتشافها بشكل سلبي عن طريق المرفق الصحي أو ممرضات الدراسة في المجتمع) أو بدون أعراض المتصورة المنجلية تم تقييم العدوى (المكتشفة بنشاط باستخدام PCR من عينات المسح الشهرية) باستخدام معادلات التقدير المعممة (GEE). تم تعديل التحليل للفئة العمرية (1-5 سنوات ، 6-15 سنة ، وأكثر من 15 سنة) واستخدام الناموسيات المعالجة بمبيدات الحشرات طويلة الأمد (LLINs) في آخر 24 ساعة وسمح بالتكتل على مستوى المركب ، حيث المجمع عبارة عن مجموعة من المنازل الموجودة في موقع مركزي حول مسكن رئيسي. تم تقييم حجم الارتباط بين استجابة الجسم المضاد واحتمالات الإصابة للتفاعل مع الفئة العمرية. بناءً على مجموعة فرعية من العينات الطولية ، تم أيضًا تقييم الارتباط على المستوى الفردي بين استجابة الجسم المضاد والعدوى الحديثة في الأشهر الأربعة السابقة (على عكس العدوى الحالية في نفس النقطة الزمنية) باستخدام نموذج GEE ، المعدل حسب الفئة العمرية ، واستخدام LLIN ، والتأثيرات العشوائية على المستوى المركب ، على النحو الوارد أعلاه.

باستخدام نموذج GEE ، تم تقييم احتمالات الإصابة بالملاريا السريرية أو العدوى عديمة الأعراض على المستوى الفردي للارتباط مع الإقامة في نفس المركب كفرد إيجابي مصل. وبالمثل ، تم تقييم الارتباط بين الاحتمالات الفردية للعدوى والانتشار المصلي على مستوى المركب (& lt 50٪ أو & gt 50٪) باستخدام نموذج خطي معمم ذو تأثيرات مختلطة تم تعديله للفئة العمرية واستخدام LLIN والتأثيرات العشوائية على مستوى المركب ، والذي يفسر أيضًا التأثير المحتمل للاختلافات الجغرافية في كثافة الإرسال. لضمان عدم تحيز التقديرات من خلال الانتشار المصلي للمركبات الصغيرة ، تم ترجيح التحليل بعدد الأفراد في المركب (الذين تم تقييم حالتهم المصلية) وشمل فقط المركبات التي تحتوي على أربعة أفراد على الأقل. كانت النماذج مناسبة باستخدام حزم "geeM" و "lme4" في الإصدار R 3.14.

الانتشار المصلي على مستوى القرية بين الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 2-10 سنوات في منطقة الساحل الغربي ومنطقة أعالي النهر في شهري يوليو وديسمبر 2013 (ن = 1001) إكلينيكيًا لجميع الأعمار المتصورة المنجلية معدلات الإصابة بالعدوى من نفس الأشهر ، والتي تم الإبلاغ عنها سابقًا بواسطة Mwesigwa et al. [13]. السريرية الشهرية و المتصورة المنجلية تم تعريف معدلات الإصابة بالعدوى على أنها عدد الحالات السريرية الجديدة أو عدد الحالات السريرية الجديدة المتصورة المنجلية العدوى (الأفراد إيجابيون PCR الذين كانوا سلبيين PCR في المسح الشهري السابق) مقسومًا على إجمالي سنوات الشخص المعرضة للخطر (PYAR). تم اختيار هذه الفئة العمرية لتتماشى مع مقاييس المراقبة الروتينية الأخرى ، مثل مؤشر الطفيلي السنوي (API) ، والذي يستخدم عادة هذه الفئة العمرية كمجموعة خافرة. تم تقييم قوة العلاقة بين معدلات الحدوث على مستوى القرية والانتشار المصلي لكل مستضد باستخدام معامل ارتباط بيرسون. لم يتم تضمين البيانات من أبريل وديسمبر 2014 في التحليل بسبب الإصابة السريرية و ص لم يتم الإبلاغ عن معدلات الإصابة من هذه الدراسات الاستقصائية.


فحوصات الأمصال المتعددة SARS-CoV-2

فحوصات الأمصال ProcartaPlex

تشمل البروتينات التي تعمل كمستضدات أولية لتحفيز الاستجابة المناعية المنتجة للأجسام المضادة IgA و IgM و IgG أثناء عدوى SARS-CoV-2 القابس النوكليوكابسيد (N) والبروتين السنبلة (S) والمناطق الفرعية من البروتين الشائك مثل كمجال ربط المستقبلات (RBD) ومناطق S1. يحتوي بروتين Nucleocapsid (N) على أعلى تماثل (90٪) بين SARS-CoV-1 و SARS-CoV-2 (1). تم تطوير مجموعات اختبار الأمصال المتاحة خلال المرحلة المبكرة من وباء SARS-CoV-2 لاكتشاف الأجسام المضادة ضد Nucleocapsid ، والتي أظهرت تفاعلًا متصالبًا كبيرًا ، وبالتالي قراءات إيجابية خاطئة أعلى للأشخاص المعرضين لـ SARS-CoV-1 (1) . يتجمع بروتين السارس- CoV spike (S) في بنية مشذبة لتشكيل مظهر يشبه التاج (ومن ثم الهالة) ويتكون من الوحدة الفرعية S1 و S2. ضمن S1 ، يكون مجال ربط المستقبلات (RBD) ، الموجود في المجال الفرعي C-terminal ، له هوية أعلى (74٪) بين SARS-CoV و SARS-CoV-2 من المجال N-terminal ، بما يتوافق مع وجهة النظر القائلة بأن قد يستخدم SARS-CoV-2 ACE2 كمستقبل للدخول إلى الخلايا المضيفة مثل SARS-CoV (2). تم تحديد RBD كواحد من مواقع المناعة لبروتين السارس SARS-CoV-2 ، حيث ترتبط الأجسام المضادة ضد بروتين السنبلة بشكل جيد بالتعادل. بالإضافة إلى ذلك ، من المهم اختبار التفاعل المتبادل المصلي مع فيروسات كورونا المستوطنة والموسمية لاستبعاد النتائج الإيجابية الكاذبة. تتيح لوحة Human Coronavirus Ig Total 11-Plex ProcartaPlex فحص أربعة أجسام مضادة لـ SARS-CoV-2 (Spike trimer ، و S1 subunit ، و RBD ، و Nucleocapsid) ، وستة سلالات من فيروس كورونا (SARS-CoV-1 ، و MERS ، و CoV-NL63 ، و CoV -KHU1 و CoV-229E و CoV-OC43) ، وعنصر تحكم سلبي واحد في بئر واحد باستخدام تقنية Luminex xMAP. يمكن أن يوفر الاكتشاف المتزامن للأجسام المضادة لـ SARS-CoV-2 والأجسام المضادة لفيروس كورونا ذات الصلة في فحص واحد الوقت لتوفير مجموعة بيانات كاملة وشاملة باستخدام عينات البلازما أو المصل.

الشكل 1. نتائج الفحص من 39 Covid PCR (+) و 168 ضوابط PCR (-) صحية لمستضدات SARS-CoV-2. تُظهر النتائج مستويات الأجسام المضادة المكتشفة لمستضدات مؤقت السنبلة ، ومستضدات S1 و RBD و Nucleocapsid تتوافق مع النتائج المتوقعة لمستويات عالية من الأجسام المضادة لـ PCR (+) ومستويات منخفضة من الأجسام المضادة لعينات PCR (-).


وثائق فحص SARS-CoV-2 وموارد أمبير

وثائق

دليل تعليمات فحص الأمصال Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 (PDF 601 كيلوبايت)

تعرف على المزيد حول الفحص مع الإرشادات التفصيلية وسير العمل ومحتويات المجموعة والتخزين ونصائح استكشاف الأخطاء وإصلاحها باستخدام دليل التعليمات هذا.

الدليل السريع لفحوصات Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 الأمصال (ملف PDF بحجم 68 كيلوبايت)

تعرف على كيفية إعداد وتشغيل لوحة فحص أمصال Bio-Plex SARS-CoV-2 كاملة 96 بئر باستخدام هذا الدليل السريع.

ورقة معلومات منتج لوحة Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 N / RBD / S1 / S2 (PDF 439 كيلوبايت)

الحصول على تفاصيل المنتج مثل خصائص الفحص ونتائج التفاعل المتبادل مع ورقة معلومات المنتج هذه.

بروتوكول الفحص شبه الكمي Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 (PDF 96 كيلوبايت)

احصل على نتائج باستخدام هذا البروتوكول شبه الكمي للاستخدام مع فحوصات الأمصال Bio-Plex Human IgG SARS-CoV-2 N / RBD / S1 / S2.

كتيب أنظمة Bio-Plex Multiplex (ملف PDF 15.9 ميجابايت)

تعرف على كيفية تقليل الوقت المستغرق للوصول إلى النتائج والعينات أثناء اكتشاف المزيد باستخدام المقايسات المناعية المتعددة Bio-Plex والأدوات والبرامج.

المقايسات الأمصلية الكمية Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 باستخدام ملاحظة تطبيق منحنى قياسي (PDF 420 كيلوبايت)

تعرف على كيفية التحقق من صحة التحكم المصلي في VIROTROL SARS-CoV-2 لاستخدامه كمواد مرجعية لتقدير مستويات السارس-CoV-2 والأجسام المضادة IgG الخاصة بـ Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 في مذكرة التطبيق هذه.

دليل تحليل Bio-Plex (ملف PDF 2.2 ميجابايت)

استكشف مختلف المقايسات المناعية واللوحات المناعية المتعددة المتاحة على منصة Bio-Plex. Evaluate assay performance characteristics and sample data to choose the panel that fits your application.

Webinars

Role of Aberrant Cytokine Activity in Host Immune Response to COVID-19

In this webinar, we discuss early research and nascent hypotheses regarding the pathophysiology of SARS-CoV-2 induced COVID-19 disease by evaluating cytokine and chemokine profiles, the role of chronic inflammation in comorbidities, and the arc of immune resolution of historical virulent pathogens, such as SARS and MERS.

Multiplex Immunoassays in Vaccine Research and Development

Get the most data out of your sample, without spending time on individual ELISAs. Learn how multiplex assays are being used on the front lines to understand patient immune response during infection, and discuss the most commonly asked questions around targets, panels, and multi-plate data analysis.

Vaccine Development and Manufacturing

Tips for overcoming developmental hurdles, technologies that can shorten timelines, and novel tools for manufacturing and quality control.

Immunological Response Factors to SARS‑CoV‑2 in Acquired Immunity

In this webinar, we will be discussing the immune response to SARS‑CoV2, both in the context of natural exposure to the virus as well as induced immunity from vaccination. We will also investigate the relationship between symptom severity and the longevity of acquired immunity.


SARS-CoV-2 Assays To Detect Functional Antibody Responses That Block ACE2 Recognition in Vaccinated Animals and Infected Patients

FIG 1 ACE2 receptor expression and affinity. (A) Overview of soluble ACE2 receptor design (ACE2-IgHu). (B) Affinity of SARS CoV-2 receptor binding domain for immobilized ACE2-IgHu assessed by SPR (27 nM) curves are concentrations of RBD X, Y, and Z. (C) Affinity of ACE2-IgHu for immobilized SARS CoV-2 full-length spike protein assessed by ELISA. Optimal concentration of ACE2-IgHu for competition assays (∼EC90, red arrow) requires high signal without excess receptor present. FIG 2 ACE2 receptor competition assay development. (A) Competition ELISA schematic displaying immobilized anti-His pAb (red) capturing His6×-tagged SARS-CoV-2 spike protein (rainbow). Premixed ACE2-IgHu (green, blue) at a constant concentration with a dilution series of competitors (green, red) is added, and anti-human HRP (green) determines the amount of ACE2-IgHu remaining in the presence of competitors through a colorimetric readout. (B) Four constant concentrations of ACE2-IgHu were tested with various concentrations of the ACE2-IgMu competitor to establish an optimal ACE2-IgHu concentration which displays a full blocking curve (red, 0.10 μg/ml) from the competitor dilution series while retaining a wide range in signal. (C) Pseudovirus neutralization curves for a control antibody (non-SARS-CoV-2) in red and for ACE2-IgHu in blue.

Animal IgG and serological competition.

FIG 3 Animal IgG and serological competition. (A) IgG and serological competition schematic. Anti-His pAb captures SARS-CoV-2 spike protein. Immunized sera or IgG from small animals are used as competitors to block ACE2-IgHu receptor binding when premixed. ACE2-IgHu remaining is determined from an anti-human-HRP colorimetric readout. (B) IgGs present in a vaccinated BALB/c mouse block ACE2-IgHu binding with greater effect when the full-length SARS-CoV-2 S1-S2 spike protein is immobilized versus the S1 subunit by itself. (C) Area under the concentration-time curve (AUC) schematic displaying the larger area for uninhibited ACE2 binding versus the area from curves showing competition with ACE2. (D) AUC of IgGs purified from immunized rabbit sera (IgGr low dose, blue IgGr high dose, red) versus naive IgGr or day 0 IgGr. (E) AUC of sera from immunized rabbits (low dose rabbit sera, blue high dose rabbit sera, red) versus naive rabbit sera or day 0 rabbit sera. (F) AUC of sera from immunized guinea pigs at week 2 (dark blue) and individual animals (blue), naive sera (gray), and pooled day 0 sera from all animals (black). The pooled immunized curve displayed a comparable AUC to the average AUC from all individual immunized animals.

Primate serological competition.

FIG 4 Primate serological competition. (A) Competition ELISA schematic displaying immobilized His6×-tagged SARS-CoV-2 spike protein (rainbow). Preblocking of the spike protein with primate sera (blue) at various concentrations was added followed by ACE2-IgMu (green, blue) at a constant concentration. Anti-mouse HRP (green) determines the amount of ACE2-IgMu remaining in the presence of competitors through a colorimetric readout. (B) Affinity of ACE2-IgMu for immobilized SARS-CoV-2 S1+S2 full-length spike protein assessed by ELISA. Optimal concentration of ACE2-IgMu for competition assays (red arrow, 0.4 μg/ml) requires high signal without excess receptor present. (C) Optimal ACE2-IgMu concentration which displays a full blocking curve (0.40 μg/ml) from the competitor dilution series (ACE2-IgHu) while retaining a wide range in signal. (D) NHP sera pooled from five vaccinated animals were used as competitors in the primate competition assay. The AUC from vaccinated NHP sera (blue) versus day 0 NHP sera (black). (E) Human sera from nine SARS-CoV-2-positive COVID-19 patients were tested in the primate competition assay and compared with 16 naive human sera collected prepandemic. The AUC of the COVID-19 patient serum (purple) is significantly decreased compared to the prepandemic human serum (gray). The median is shown as a solid black line, and quartiles are shown as dashed black lines. (F) Human sera were analyzed by a pseudovirus neutralization assay. The samples and the coloring are the same as in (E). Statistics include a two-tailed ر test with ص values indicated. FIG 5 ACE2 receptor blocking correlates with pseudovirus neuralization. A symbol represents each of the individual datapoints where we had a paired AUC blocking and pseudovirus ID50 values. The human samples are in triangles, the mice in circles, individual Guinea pigs in squares, Guinea pig pools in diamonds, and rabbit pools in hexagons. SARS-CoV-2 spike-experienced samples are shown in color. Naïve samples and healthy donors are shown in gray. Least-squares fit line is shown with ص value and R squared from Prism.

SPR-based assay for ACE2 receptor blocking.

FIG 6 ACE2 receptor competition assay development. (A) Overview of SPR experiment depicting SARS-CoV-2 RBD capture by streptavidin-biotin interaction, sera injected as analyte, and ACE2 injected as second analyte. (B) Sensorgram for ACE2 blocking SPR assay with ACE2-IgHu injected as sample (ACE2عينة) as indicated and ACE-IgHu injected as receptor (ACE2مستقبل) as indicated. Sample responses were referenced to blank injections. Each curve corresponds to a 3-fold dilution of ACE2عينة starting at 1,500 nM as indicated on the right, and the ACE2مستقبل was injected at a constant concentration of 100 nM to all curves. (C) Response in RUs measured at the end of sample (ACE2عينة) injection (blue) and receptor (ACE2مستقبل) injection (red) at each concentration of sample. (D) ACE2 inhibition curve derived from RUs at each concentration.

شكر وتقدير

We thank all the participants involved in the study Bernie McCudden and Jenny Mitchell for support with the cohort and Jill Garlick, Janine Roney, Anne Paterson and the research nurses at the Alfred Hospital. This work was supported by the Australian National Health and Medical Research Council (NHMRC) Leadership Investigator Grant to KK (#1173871), NHMRC Program Grant to DLD (#1132975), Research Grants Council of the Hong Kong Special Administrative Region, China (#T11-712/19-Ncdf) to KK, the Jack Ma Foundation to KK, KS and AWC, the Medical Research Future Fund (#2005544) to KK, SJK, AKW and AWC, the a2 Milk Foundation to KS, MRFF Award (#1202445) to KK, NHMRC Program Grant (#1071916) to KK. KK was supported by NHMRC Senior Research Fellowship (1102792), DLD by a NHMRC Principal Research Fellowship (#1137285) and KS by an NHMRC Investigator grant (#1177174). THON is supported by NHMRC EL1 Fellowship (#1194036). LH is supported by the Melbourne International Research Scholarship (MIRS) and the Melbourne International Fee Remission Scholarship from The University of Melbourne. JRH and WZ are supported by the Melbourne Research Scholarship from The University of Melbourne. XJ is supported by China Scholarship Council-University of Melbourne joint Scholarship. CES has received funding from the European Union's Horizon 2020 research and innovation programme under the Marie Skłodowska-Curie grant agreement (#792532). CES and KS received funding from the Doherty Collaborative Seed Grant. KK and AWC were supported by the University of Melbourne Dame Kate Campbell Fellowship. The Melbourne WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Influenza is supported by the Australian Government Department of Health.


SARS-CoV-2 Serology Testing in the Setting of Vaccination

To enable an effective vaccination strategy, we advocate for the use of accessible, automated, high-throughput SARS-CoV-2 serology testing to help confirm efficacy and promote public health. Siemens Healthineers formulated a position paper based on input from experts in the infectious disease, immunology and vaccine development fields and the currently available body of literature.

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

"The position statement that you have here is timely. We need to have this discussion and preparation ahead of vaccinating the general population. Serology status is incredibly important due to asymptomatic carriers, and as these vaccines are introduced the need for robust neutralizing antibody testing would become even more important to understand where we are both before and after vaccination."

University of Cambridge (UK), Department of Medicine/CITIID

“As an immunologist and clinician, I certainly see the value of serology testing in understanding the immune response to vaccines, as outlined in the position paper. With every Covid-19 vaccine targeting the spike protein, it just makes sense that measuring the immune response against spike protein is the focus going forward with serology testing. Further, scientifically I think we’re going to see a quantitative threshold for Covid-19 antibody levels that becomes apparent in which the Covid-19 immune response weakens enough that the risk of infection returns. In this respect, measuring Covid-19 antibodies after a natural infection or after vaccination will determine if someone has reached that protective threshold and remeasuring antibody levels over time will determine the need to reimmunize. In some cases, if people who have had Covid-19 infection or those who have been immunized didn’t produce sufficient antibodies, they may need to be revaccinated sooner rather than later.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

"The position statement that you have here is timely. We need to have this discussion and preparation ahead of vaccinating the general population. Serology status is incredibly important due to asymptomatic carriers, and as these vaccines are introduced the need for robust neutralizing antibody testing would become even more important to understand where we are both before and after vaccination."

University of Cambridge (UK), Department of Medicine/CITIID

“As an immunologist and clinician, I certainly see the value of serology testing in understanding the immune response to vaccines, as outlined in the position paper. With every Covid-19 vaccine targeting the spike protein, it just makes sense that measuring the immune response against spike protein is the focus going forward with serology testing. Further, scientifically I think we’re going to see a quantitative threshold for Covid-19 antibody levels that becomes apparent in which the Covid-19 immune response weakens enough that the risk of infection returns. In this respect, measuring Covid-19 antibodies after a natural infection or after vaccination will determine if someone has reached that protective threshold and remeasuring antibody levels over time will determine the need to reimmunize. In some cases, if people who have had Covid-19 infection or those who have been immunized didn’t produce sufficient antibodies, they may need to be revaccinated sooner rather than later.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

Serology tests can inform vaccination utilization and status of vaccine response at multiple junctures:

  • Data to establish a threshold for protection or immunity
  • Post-vaccination initial response 1
  • Duration of vaccination response 2

Appropriate characteristics of a serology assay in the assessment of need to vaccinate and vaccine response:

  • Quantitative results
  • Spike protein receptor-binding domain (S1 RBD) neutralizing IgG antibody detection
  • Very high specificity (≥99.5%)

Neutralization of the SARS-CoV-2 virus with S1-RBD

Neutralizing Antibodies: Why the Spike Protein?

SARS-CoV-2 serology assays that utilize the receptor-binding domain (RBD) of the S1 spike antigen detect neutralizing antibodies that block the virus entry into cells. 3-8 S1-RBD-specific assays are likely to prove advantageous over S1 and whole spike, especially if using a quantitative assay, as neutralizing versus binding antibodies might be expected to be enriched and therefore better correlate to immunity.

The utilization of the S1-RBD is aligned with the multiple vaccines in development that target or include the SARS-CoV-2 S1 RBD, with the goal of producing neutralizing (and therefore likely protective) antibodies in vaccinated subjects. 9 The spike protein and particularly the RBD are the most common target of vaccine designs.


SARS-CoV-2 Multiplex Serology Assays

ProcartaPlex Serology Assays

The proteins that serve as primary antigens to stimulate an immune response producing IgA, IgM, and IgG antibodies during SARS-CoV-2 infection include the nucleocapsid (N), the spike (S) protein, and sub-regions of the spike protein such as the receptor binding domain (RBD) and the S1 regions. The Nucleocapsid (N) protein has the highest homology (90%) between SARS-CoV-1 and SARS-CoV-2 (1). Serology test kits available during the early phase of the SARS-CoV-2 pandemic were developed to detect antibodies against the Nucleocapsid, which displayed significant cross-reactivity, and thus higher false positive readings for subjects exposed to SARS-CoV-1 (1). The SARS-CoV spike (S) protein assembles into a trimerized structure to form a crown-like (hence corona) appearance and is composed of a S1 and S2 subunit. Within S1, the receptor binding domain (RBD), which is located in the C-terminal subdomain, has higher identity (74%) between SARS-CoV and SARS-CoV-2 than the N-terminal domain, consistent with the view that SARS-CoV-2 may use ACE2 as its receptor for entry into host cells like SARS-CoV (2). The RBD has been identified as one of the immunodominant sites of the SARS-CoV-2 spike protein, with antibodies against the spike protein correlating well with neutralization. In addition, it is important to test serologic cross-reactivity with endemic and seasonal coronaviruses to rule out false-positive results. The Human Coronavirus Ig Total 11-Plex ProcartaPlex Panel enables screening of four SARS-CoV-2 antibodies (Spike trimer, S1 subunit, RBD, and Nucleocapsid), six coronavirus strains (SARS-CoV-1, MERS, CoV-NL63, CoV-KHU1, CoV-229E, CoV-OC43 ), and one negative control in a single well using Luminex xMAP technology. Simultaneous detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies and related coronavirus antibodies in one assay can save time to provide a complete, holistic data set using plasma or serum samples.

Figure 1. Screening results from 39 Covid PCR (+) and 168 healthy PCR (-) controls for SARS-CoV-2 antigens. Results show antibody levels detected for spike timer, S1, RBD, and Nucleocapsid antigens correspond to the expected results of high antibody levels for PCR (+) and low antibody levels for PCR (-) samples.


مراجع

ناجي H (2020) ظهور فيروس كورونا 2019-nCoV الجديد. Eur J Med Health Sci. https://doi.org/10.24018/ejmed.2020.2.1.169

Chan JFW، Li KSM، To KKW et al (2012) هل اكتشاف فيروس betacoronavirus البشري 2c EMC / 2012 (HCoV-EMC) هو بداية وباء شبيه بالسارس؟ J Infect 65:477–489. https://doi.org/10.1016/j.jinf.2012.10.002

Lim YX, Ng YL, Tam JP, Liu DX (2016) Human coronaviruses: a review of virus–host interactions. Diseases. https://doi.org/10.3390/diseases4030026

Jones BA ، Grace D ، Kock R et al (2013) ظهور الأمراض الحيوانية المنشأ المرتبطة بالتكثيف الزراعي والتغير البيئي. Proc Natl Acad Sci 110:8399–8404. https://doi.org/10.1073/pnas.1208059110

Kahn JS، McIntosh K (2005) التاريخ والتطورات الحديثة في اكتشاف فيروس كورونا. بيدياتر تصيب Dis J 24: S223 – S227. https://doi.org/10.1097/01.inf.0000188166.17324.60

Fehr AR ، Perlman S (2015). Coronaviruses: an overview of their replication and pathogenesis. في فيروسات كورونا. Methods in molecular biology. مطبعة هيومانا ، نيويورك ، ص 1 - 23

Sun C و Chen L و Yang J et al (2020) SARS-CoV-2 و SARS-CoV ومقارنة ربط المستقبلات والتأثيرات المحتملة على تحييد الأجسام المضادة وتطوير اللقاح. bioRxrv. https://doi.org/10.1101/2020.02.16.951723

Schmaljohn AL (2013) الأجسام المضادة المضادة للفيروسات الواقية التي تفتقر إلى النشاط المعادل: السوابق وتطور المفاهيم. Curr HIV Res 11: 345–353. https://doi.org/10.2174/1570162x113116660057

Bosch BJ، De HCAM، Rottier PJM (2004) Coronavirus spike glycoprotein الممتد عند نهاية الكربوكسي مع البروتين الفلوري الأخضر ، هو تجميع مختص. ياء فيرول 78: 7369-7378. https://doi.org/10.1128/JVI.78.14.7369

Fan H, Ooi A, Tan YW et al (2005) The nucleocapsid protein of coronavirus infectious bronchitis virus: crystal structure of its N-terminal domain and multimerization properties. الهيكل 13: 1859-1868. https://doi.org/10.1016/j.str.2005.08.021

Jiang S و Hillyer C و Du L (2020) تحييد الأجسام المضادة ضد SARS-CoV-2 وفيروسات كورونا البشرية الأخرى. اتجاهات إمونول 41: 355-359. https://doi.org/10.1016/j.it.2020.03.007

di Gabriella M و Cristina S و Concetta R et al (2020) عدوى SARS-Cov-2: استجابة جهاز المناعة البشري والآثار المحتملة للاختبار والعلاج السريع. إنت إمونوفارماكول 84: 106519. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2020.106519

Lin Q ، Zhu L ، Ni Z et al (2020) مدة الأجسام المضادة المعادلة في المصل لـ SARS-CoV-2: دروس من عدوى SARS-CoV. J Microbiol Immunol تصيب. https://doi.org/10.1016/j.jmii.2020.03.015

Vashist SK (2020) فحوصات التشخيص المختبري لـ COVID-19: التطورات الحديثة والاتجاهات الناشئة. Diagnostics 10:202. https://doi.org/10.3390/diagnostics10040202

Zhou P و Lou YX و Wang XG et al (2020) تفشي الالتهاب الرئوي المرتبط بفيروس كورونا جديد من أصل محتمل للخفافيش. طبيعة 579: 270-273. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2012-7

Park TJ ، Hyun MS ، Lee HJ et al (2009) جهاز استشعار رنين للبروتين السطحي قائم على بروتين الاندماج الذاتي للتشخيص السريع لمتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة. تالانتا 79: 295-301. https://doi.org/10.1016/j.talanta.2009.03.051

Park TJ ، Lee S-K ، Yoo SM وآخرون (2011) تطوير جهاز استشعار حيوي عاكس باستخدام تصنيع البلورات النانوية الضوئية الوظيفية. J Nanosci Nanotechnol 11: 632-637. https://doi.org/10.1166/jnn.2011.3269

Woo PCY و Lau SKP و Wong BHL et al (2004) الملف الطولي للغلوبولين المناعي G (IgG) و IgM و IgA ضد البروتين النووي الناجم عن متلازمة التنفس الحاد الوخيم (SARS) في المرضى الذين يعانون من الالتهاب الرئوي بسبب فيروس كورونا SARS. مختبر التشخيص كلين إمونول 11: 665 - 668. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.4.665

Siracusano G ، Pastori C ، Lopalco L (2020) الاستجابات المناعية الخلطية لمرضى COVID-19: نافذة على أحدث ما توصلت إليه التكنولوجيا. إمونول أمامي 11: 1049. https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.01049

Zhang N و Wang L و Deng X et al (2020) التطورات الحديثة في اكتشاف عدوى فيروس الجهاز التنفسي لدى البشر. J Med Virol 92:408–417. https://doi.org/10.1002/jmv.25674

van der Hoek L (2007) فيروسات كورونا البشرية: ما الذي تسببه؟ مضاد الفيروسات هناك 12: 651-658

Carlos WG و Dela Cruz CS و Cao B et al (2020) فيروس كورونا الجديد ووهان (2019-nCoV). Am J Respir Crit Care Med 201: P7 – P8. https://doi.org/10.1164/rccm.2014P7

Lam CWK ، Chan MHM ، Wong CK (2004) متلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة: المظاهر السريرية والمخبرية. Clin Biochem Rev 25:121–132

Wong TW (2006) "هل سيتكرر وباء السارس؟" تحليل استعادي لآراء الخبراء. J Epidemiol Community Heal 60:87

Rabaan AA (2017) Middle East respiratory syndrome coronavirus: five years later. خبير Rev Respir Med 11: 901-912. https://doi.org/10.1080/17476348.2017.1367288

Hu B, Ge X, Wang L-F, Shi Z (2015) Bat origin of human coronaviruses. Virol J 12: 221. https://doi.org/10.1186/s12985-015-0422-1

Chan JF-W, Kok K-H, Zhu Z et al (2020) Genomic characterization of the 2019 novel human-pathogenic coronavirus isolated from a patient with atypical pneumonia after visiting Wuhan. الميكروبات الناشئة تصيب 9: 221-236. https://doi.org/10.1080/22221751.2020.1719902

Lu H, Stratton CW, Wei Y (2020) The Wuhan SARS-CoV-2—What’s next for China. J Med Virol 92:546–547. https://doi.org/10.1002/jmv.25738

Kwong KCNK، Mehta PR، Shukla G، Mehta AR (2020) COVID-19، SARS and MERS: منظور عصبي. ياء نوتر نيوروسسي. https://doi.org/10.1016/j.jocn.2020.04.124

World Health Organization (2020) WHO Coronavirus Disease (COVID-19) Dashboard. https://covid19.who.int/

Zheng J (2020) SARS-CoV-2: an emerging coronavirus that causes a global threat. Int J Biol Sci 16: 1678–1685. https://doi.org/10.7150/ijbs.45053

Lu R و Zhao X و Li J et al (2020) التوصيف الجينومي وعلم الأوبئة لفيروس كورونا الجديد 2019: الآثار المترتبة على أصول الفيروس وربط المستقبلات. Lancet 395:565–574. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30251-8

Wong HYF و Lam HYS و Fong AH-T et al (2020) تواتر وتوزيع نتائج التصوير الشعاعي للصدر في المرضى المصابين بفيروس COVID-19. الأشعة. https://doi.org/10.1148/radiol.2020201160

Kim S-H و Ko J-H و Park GE وآخرون (2017) العروض التقديمية غير النمطية لعدوى MERS-CoV في المضيفين الذين يعانون من نقص المناعة. J Infect Chemother 23:769–773. https://doi.org/10.1016/j.jiac.2017.04.004

Zeng Q و Chen L و Cai X et al (2003) تصوير الصدر بالأشعة السينية والتصوير المقطعي المحوسب في تشخيص السارس. Chin J Radiol 37: 600-603

Zhu X, Wang X, Han L et al (2020) Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification combined with nanoparticles-based biosensor for diagnosis of COVID-19. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037796

Hirotsu Y, Mochizuki H, Omata M (2020) Double-Quencher Probes improved the detection sensitivity of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) by one-step RT-PCR. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037903

Qiu G و Gai Z و Tao Y et al (2020) أجهزة استشعار حيوية ضوئية حرارية مزدوجة الوظائف للكشف عن فيروس كورونا 2 للمتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة بدقة عالية. ACS Nano. https://doi.org/10.1021/acsnano.0c02439

Diao B, Wen K, Chen J et al (2020) Diagnosis of acute respiratory syndrome coronavirus 2 infection by detection of nucleocapsid protein. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.07.20032524

Layqah LA، Eissa S (2019) جهاز استشعار كهروكيميائي مناعي لفيروس كورونا المرتبط بمتلازمة الشرق الأوسط التنفسية باستخدام مجموعة من أقطاب الكربون النانوية الذهبية المعدلة. Microchim Acta 186: 224. https://doi.org/10.1007/s00604-019-3345-5

Meyer B, Drosten C, Müller MA (2014) Serological assays for emerging coronaviruses: challenges and pitfalls. دقة الفيروس 194: 175-183. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2014.03.018

Liu L, Liu W, Zheng Y et al (2020) A preliminary study on serological assay for severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) in 238 admitted hospital patients. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.06.20031856

Cheng MS, Toh C-S (2013) Novel biosensing methodologies for ultrasensitive detection of viruses. محلل 138: 6219-6229. https://doi.org/10.1039/C3AN01394D

Huang X, Wei F, Hu L et al (2020) Epidemiology and clinical characteristics of COVID-19. قوس إيران المتوسط ​​23: 268-271. https://doi.org/10.34172/aim.2020.09

Abbasi J (2020) The promise and peril of antibody testing for COVID-19. جاما. https://doi.org/10.1001/jama.2020.6170

Ksiazek TG, Erdman D, Goldsmith CS et al (2003) A novel coronavirus associated with severe acute respiratory syndrome. N Engl J Med 348:1953–1966. https://doi.org/10.1056/NEJMoa030781

Leung DTM, Tam FCH, Ma CH et al (2004) Antibody response of patients with severe acute respiratory syndrome (SARS) targets the viral nucleocapsid. J Infect Dis 190:379–386. https://doi.org/10.1086/422040

Tan Y-J, Goh P-Y, Fielding BC et al (2004) Profiles of antibody responses against severe acute respiratory syndrome coronavirus recombinant proteins and their potential use as diagnostic markers. مختبر التشخيص كلين إمونول 11: 362 - 371. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.362

Wu H-S و Chiu S-C و Tseng T-C et al (2004) الأساليب البيولوجية الجزيئية والمصلية المرتبطة بالسارس. تصيب الطارئ ديس 10: 304-310. https://doi.org/10.3201/eid1002.030731

Amanat F و Stadlbauer D و Strohmeier S et al (2020) اختبار مصل للكشف عن الانقلاب المصلي لـ SARS-CoV-2 في البشر. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037713

Khan S و Nakajima R و Jain A et al (2020) تحليل التفاعل التبادلي المصلي بين فيروسات كورونا البشرية الشائعة و SARS-CoV-2 باستخدام ميكروأري مستضد فيروسات التاجية. bioRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.24.006544

Lin D, Liu L, Zhang M et al (2020) Evaluations of serological test in the diagnosis of 2019 novel coronavirus (SARS-CoV-2) infections during the COVID-19 outbreak. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.27.20045153

Zhang P و Gao Q و Wang T et al (2020) تقييم البروتينات المؤتلفة nucleocapsid والبروتينات المرتفعة للتشخيص المصلي لمرض فيروس كورونا الجديد 2019 (COVID-19). medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20036954

Maache M ، Komurian-Pradel F ، Rajoharison A et al (2006) تم تصحيح النتائج الإيجابية الكاذبة في اختبار لطخة الجهاز التنفسي الغربي الحاد المؤتلف باستخدام وحدتين فرعيتين (S1 و S2) من السنبلة للكشف عن الأجسام المضادة لـ SARS- CoV. Clin Diagn Lab Immunol 13:409–414. https://doi.org/10.1128/CVI.13.3.409

Xiang J و Yan M و Li H et al (2020) تقييم مجموعة المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم ومجموعة مقايسة الكروماتوغرافيا المناعية للذهب الغرواني للكشف عن فيروس كورونا الجديد (SARS-Cov-2) الذي يتسبب في تفشي الالتهاب الرئوي (COVID-19). medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.02.27.20028787

Hoy CFO و Kushiro K و Yamaoka Y وآخرون (2019) اختبار مناعي سريع متعدد الألياف يعتمد على الألياف الدقيقة لاكتشاف الأجسام المضادة لـ MERS-CoV. Sens Bio Sens Res. https://doi.org/10.1016/j.sbsr.2019.100304

Aydin S (2015) تاريخ قصير ومبادئ وأنواع ELISA وخبرتنا المعملية في تحليل الببتيد / البروتين باستخدام ELISA. الببتيدات 72: 4-15. https://doi.org/10.1016/j.peptides.2015.04.012

Wang Y-D و Li Y و Xu G-B et al (2004) الكشف عن الأجسام المضادة ضد SARS-CoV في مصل الدم من متبرعين مصابين بالسارس باستخدام ELISA و Western blot. Clin Immunol 113:145–150. https://doi.org/10.1016/j.clim.2004.07.003

Carattoli A ، Di BP ، Grasso F et al (2005) ELISA المؤتلف القائم على البروتين والمقايسة المناعية الخلوية الكيميائية لتشخيص السارس. J ميد فيرول 76: 137 - 142. https://doi.org/10.1002/jmv.20338

Woo PCY، Lau SKP، Wong BHL et al (2005) الحساسيات التفاضلية لمتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة (SARS) مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لفيروس كورونا المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (ELISA) وبروتين نوكليوكابسيد لفيروس كورونا السارس ELISA للتشخيص المصلي للالتهاب الرئوي الناجم عن فيروس كورونا السارس. J Clin Microbiol 43:3054–3058. https://doi.org/10.1128/JCM.43.7.3054

Fukushi S و Fukuma A و Kurosu T et al (2018) توصيف الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الجديدة ضد بروتين ارتفاع الفيروس التاجي MERS وتطبيقها في اكتشاف الأجسام المضادة المستقلة عن الأنواع بواسطة ELISA التنافسي. طرق J Virol 251: 22-29. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2017.10.008

Zhao J و Yuan Q و Wang H et al (2020) استجابات الأجسام المضادة لـ SARS-CoV-2 في مرضى فيروس كورونا الجديد 2019. Clin Infect Dis. https://doi.org/10.1093/cid/ciaa344

González-Martínez MÁ، Puchades R، Maquieira Á (2018) تقنية التحليل المناعي: مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). التقنيات الحديثة لتوثيق الطعام. المطبعة الأكاديمية ، نيويورك ، ص 617-657

García-González E، Aramendía M، Álvarez-Ballano D et al (2016) عينة مصل تحتوي على أجسام مضادة داخلية تتداخل مع المقايسات المناعية الهرمونية المتعددة. Laboratory strategies to detect interference. براكت لاب ميد 4: 1-10. https://doi.org/10.1016/j.plabm.2015.11.001

Guan M, Chan KH, Peiris JSM et al (2004) Evaluation and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay and an immunochromatographic test for serological diagnosis of severe acute respiratory syndrome. Clin Diagn Lab Immunol 11:699–703. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.4.699

Guan M, Chen HY, Foo SY et al (2004) Recombinant protein-based enzyme-linked immunosorbent assay and immunochromatographic tests for detection of immunoglobulin G antibodies to Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS) coronavirus in SARS patients. مختبر التشخيص كلين إمونول 11: 287 - 291. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.287

Liu X، Shi Y، Li P et al (2004) ملف تعريف للأجسام المضادة لبروتين نوكليوكابسيد لفيروس كورونا المرتبط بالمتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (سارس) في مرضى السارس المحتملين. مختبر التشخيص كلين إمونول 11: 227-228. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.1.227

Che X-Y, Qiu L-W, Liao Z-Y et al (2005) Antigenic cross-reactivity between severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus and human coronaviruses 229E and OC43. J إنفيكت ديس 191: 2033-2037. https://doi.org/10.1086/430355

Smith-Norowitz TA ، Kusonruksa M ، Wong D et al (2012) الثبات طويل الأمد للأجسام المضادة IgE المضادة للإنفلونزا A HIN1 في مصل الأطفال والبالغين بعد التطعيم ضد الإنفلونزا A مع عدوى H1N1 اللاحقة: دراسة حالة. J Inflamm Res 5:111–116. https://doi.org/10.2147/JIR.S34152

Martins-Gomes C ، Silva AM (2018). منهجيات اللطخة الغربية لتحليل تعبير البروتين في المختبر الناجم عن عوامل ماسخة. اختبار المسخ. Methods in molecular biology. مطبعة هيومانا ، نيويورك ، ص 191 - 203

Mahmood T, Yang P-C (2012) Western blot: technique, theory, and trouble shooting. N Am J Med Sci 4:429–434. https://doi.org/10.4103/1947-2714.100998

Qiu D, Tannock GA, Barry RD, Jackson DC (1992) Western blot analysis of antibody responses to influenza virion proteins. Immunol Cell Biol 70:181–191. https://doi.org/10.1038/icb.1992.23

Castejon MJ, Yamashiro R, Oliveira CAF, Veras MASM (2017) Performance validation of western blot for anti-HIV antibody detection in blood samples collected on filter paper (DBS). J Bras Patol e Med Lab 53:5–12. https://doi.org/10.5935/1676-2444.20170002

Kurien BT، Scofi RH (2015) النشاف الغربي: مقدمة. Methods in molecular biology. Humana Press, New York, pp 17–30

He Q و Chong KH و Chng HH et al (2004) تطوير اختبار لطخة غربية للكشف عن الأجسام المضادة ضد فيروس كورونا المسبب لمتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة. مختبر التشخيص كلين إمونول 11: 417-422. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.417

Wang Y و Chang Z و Ouyang J et al (2005) لمحات من الأجسام المضادة IgG لبروتينات نوكليوكابسيد و سبايك لفيروس كورونا المرتبط بالسارس في مرضى السارس. DNA Cell Biol 24:521–527. https://doi.org/10.1089/dna.2005.24.521

Guan M، Chen HY، Tan PH et al (2004) استخدام مستضد محلول فيروسي مع بروتين مؤتلف في اختبار طقطقة مناعية غربية كاختبار تأكيدي للتشخيص المصلي لمتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة. مختبر التشخيص كلين إمونول 11: 1148-1153. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.6.1148

Odell ID, Cook D (2013) Immunofluorescence techniques. J Investig Dermatol 133:e4. https://doi.org/10.1038/jid.2012.455

Dilnessa T ، Zeleke H (2017) زراعة الخلايا وتأثير الاعتلال الخلوي وتشخيص التألق المناعي للعدوى الفيروسية. J Microbiol Mod Technol 2: 102

Bossuyt X, Cooreman S, De Baere H et al (2013) Detection of antinuclear antibodies by automated indirect immunofluorescence analysis. كلين شيم اكتا 415: 101-106. https://doi.org/10.1016/j.cca.2012.09.021

Zhu H ، Hu S ، Jona G et al (2006) تشخيص متلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة باستخدام ميكروأري بروتين فيروس كورونا. Proc Natl Acad Sci 103:4011–4016. https://doi.org/10.1073/pnas.0510921103

Reusken C ، Mou H ، Godeke GJ et al (2013) الأمصال الخاصة لفيروسات كورونا البشرية الناشئة عن طريق مصفوفة البروتين الدقيقة. Eurosurveillance 18: 20441. https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES2013.18.14.20441

Chan PKS و Ng K-C و Chan RCW وآخرون (2004) مقايسة التألق المناعي للتشخيص المصلي للسارس. إميرج تصيب ديس 10: 530-532. https://doi.org/10.3201/eid1003.030493

Manopo I، Lu L، He Q et al (2005) تقييم مقايسة تألق مناعي آمنة وحساسة قائمة على بروتين سبايك للكشف عن استجابات الجسم المضاد لفيروس السارس. J Immunol Methods 296:37–44. https://doi.org/10.1016/j.jim.2004.10.012

Koczula KM، Gallotta A (2016) فحوصات التدفق الجانبي. مقالات Biochem 60: 111-120. https://doi.org/10.1042/EBC20150012

Wong RC ، Tse HY (2008) المقايسة المناعية للتدفق الجانبي. مطبعة هيومانا ، نيويورك

Bahadır EB, Sezgintürk MK (2016) Lateral flow assays: principles, designs and labels. اتجاهات الشرج كيم 82: 286-306. https://doi.org/10.1016/j.trac.2016.06.006

Zhao L, Sun L, Chu X (2009) Chemiluminescence immunoassay. الاتجاهات الشرجية 28: 404-415. https://doi.org/10.1016/j.trac.2008.12.006

Cai X-F ، Chen J ، Hu J-L et al (2020) مقايسة مناعية إنزيمية مغناطيسية قائمة على الببتيد للتلألؤ الكيميائي للتشخيص المصلي لمرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19). J تصيب ديس. https://doi.org/10.1101/2020.02.22.20026617

Qu J و Wu C و Li X et al (2020) لمحة عامة عن الأجسام المضادة IgG و IgM ضد فيروس كورونا 2 المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (SARS-CoV-2). Clin Infect Dis. https://doi.org/10.1093/cid/ciaa489

Turner APF (2013) المستشعرات الحيوية: الإحساس والحساسية. كيم سوك القس 42: 3184-3196. https://doi.org/10.1039/c3cs35528d

كايجيل آر إل ، بلير جنرال إلكتريك ، ميلنر با (2010) مراجعة عن أجهزة الاستشعار الحيوية الفيروسية للكشف عن مسببات الأمراض البشرية. Anal Chim Acta 681:8–15. https://doi.org/10.1016/j.aca.2010.09.038

Lakshmipriya T، Gopinath SCB (2019) مقدمة عن المستشعرات الحيوية والجزيئات الحيوية. In Nanobiosensors for biomolecular targeting. إلسفير ، نيويورك ، ص 1 - 21

Hsueh P-R, Hsiao C-H, Yeh S-H et al (2003) Microbiologic characteristics, serologic responses, and clinical manifestations in severe acute respiratory syndrome, Taiwan. Emerg Infect Dis 9:1163–1167. https://doi.org/10.3201/eid0909.030367

Peiris JSM، Lai ST، Poon LLM et al (2003) فيروس كورونا كسبب محتمل لمتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة. لانسيت 361: 1319-1325. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(03)13077-2

شي Y ، Yi Y ، Li P وآخرون (2003) تشخيص المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (SARS) عن طريق الكشف عن الأجسام المضادة nucleocapsid لفيروس كورونا SARS في مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم الذي يلتقط المستضد. J Clin Microbiol 41:5781–5782. https://doi.org/10.1128/JCM.41.12.5781

Okba NMA ، Müller MA ، Li W et al (2020) استجابات الأجسام المضادة المحددة لـ SARS-CoV-2 في مرضى COVID-19. Emerg Infect Dis. https://doi.org/10.1101/2020.03.18.20038059

Perera RAPM، Mok CKP، Tsang OTY et al (2020) الاختبارات المصلية لفيروس كورونا 2 (SARS-CoV-2) للمتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (SARS-CoV-2) ، مارس 2020. Eurosurveillance 25: 2000421. https://doi.org/10.2807/1560-7917

EUROIMMUN AG (2020) Anti-SARS-CoV-2 ELISA (IgG) Instruction for use

InBios International Inc. (2020) InBios SCoV-2 Detect TM IgG ELISA تعليمات للاستخدام

Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise Co. Ltd. (2020) WANTAI SARS-CoV-2 Ab ELISA

شركة مختبرات Bio-Rad (2020) Platelia SARS-CoV-2 Total Ab

Shanghai Fosun Long March Medical Science Co. (2020) تقرير تقييم اختبار الأمصال لـ "Fosun COVID-19 IgG / IgM Rapid Antibody Detection Kit" من Shanghai Fosun Long March Medical Science Co.، Ltd.


شاهد الفيديو: تفاعلات الجسم المضاد المستضد التفاعلات المصلية التفاعلات المناعية (ديسمبر 2022).