معلومة

ما هو IC50 بالضبط؟

ما هو IC50 بالضبط؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أنا أقرأ مقالة "نشاط مثبط bcr-abl kinase PD180970" ولكني لا أفهم كيف يعمل IC50 في الجدول 1. هل يمكنك أن تخبرني بكلمات بسيطة وتعطيني مثالاً سهلاً؟


IC50 هو تركيز المثبط الذي تلاحظ عنده نصف التثبيط الأقصى. انظر الشكل من ويكيبيديا:

IC50 يمكن اعتباره وسيلة لقياس فعالية المثبط على الوظيفة البيولوجية كإنزيم. في حالة PD180970 لديك مثبط يثبط p210 Bcr-Abl tyrosine kinase. IC50 هو التركيز الذي يتم عنده تثبيط 50٪ من الكيناز.

في الجدول 1 ، تم اختبار طفرات مختلفة من التيروزين كيناز مقابل المثبط لمعرفة ما إذا كانت الطفرات لها تأثير على IC50. هذا مهم لأن PD180970 يعتبر عقارًا مضادًا للسرطان والطفرات المحتملة تجعله أقل فعالية هنا.


IC50 هو تركيز المثبط المطلوب لتقليل نشاط الجزيء / البروتين بمقدار النصف. إنه معكوس EC50. عادةً ما تبدو منحنيات التثبيط سينية لذا فإن IC50 هي النقطة الوسطى لمنحنى S. هنا مثال. (لاحظ أن المحور Y يمكن أن يكون أي شيء تقريبًا ، مثل نشاط الإنزيم والمحور X هو التركيز في مقياس لوغاريتمي).


كيفية صنع خط خلية خالدة / كيفية تحديد IC50؟ - بروتوكول لتطوير خط خلية مقاومة للأدوية؟ (29 يناير 2007)

أحاول دراسة مقاومة العلاج الكيميائي لدوائين. كنت أتساءل عما إذا كان أي شخص يعرف البروتوكول الدقيق لتطوير خط خلية مقاومة للأدوية. من المقالات التي قرأتها ، يقولون فقط إن خطوط الخلايا المقاومة للأدوية تم إنتاجها من الإضافات التدريجية للعقار محل الاهتمام ولكن لم يكن هناك بروتوكول مفصل. في أي التقاء تم إضافة الدواء في البداية؟ هل نزيد جرعة الدواء بعد كل يوم وهل نضاعف التركيز في كل مرة؟ أيضًا ، لست متأكدًا من كيفية تحديد قيم IC50 لخطوط الخلية. لقد أجريت اختبار تكاثر الخلايا MTT باستخدام تخفيفات دوائية مختلفة وحصلت على قيم امتصاص من قراءات ELISA. ومع ذلك ، فأنا لست متأكدًا تمامًا مما يجب فعله بالقيم من أجل حساب IC50. لدي قيم للخلايا غير المعالجة والمعالجة بالعقاقير ولكني لا أعتقد أن نصف امتصاص عنصر التحكم يعادل IC50 ، أليس كذلك؟ أى أحد لديه أى فكرة؟

أحاول دراسة مقاومة العلاج الكيميائي لدوائين. كنت أتساءل عما إذا كان أي شخص يعرف البروتوكول الدقيق لتطوير خط خلية مقاومة للأدوية. من المقالات التي قرأتها ، يقولون فقط أن خطوط الخلايا المقاومة للأدوية تم إنتاجها من الإضافات التدريجية للعقار محل الاهتمام ولكن لم يكن هناك بروتوكول مفصل. في أي التقاء تم إضافة الدواء في البداية؟ هل نزيد جرعة الدواء بعد كل يوم وهل نضاعف التركيز في كل مرة؟ أيضًا ، لست متأكدًا من كيفية تحديد قيم IC50 لخطوط الخلية. لقد أجريت اختبار تكاثر الخلايا MTT باستخدام تخفيفات دوائية مختلفة وحصلت على قيم امتصاص من قراءات ELISA. ومع ذلك ، فأنا لست متأكدًا تمامًا مما يجب فعله بالقيم من أجل حساب IC50. لدي قيم للخلايا غير المعالجة والمعالجة بالعقاقير ولكني لا أعتقد أن نصف امتصاص عنصر التحكم يعادل IC50 ، أليس كذلك؟ أى أحد لديه أى فكرة؟

هناك بعض الأسئلة في رسالتك التي قد أشير إليها في IC50: من المنطقي فقط إذا كانت هناك وظيفة أو نشاط (f.i. من الإنزيمات ، ناقلات ، ATPases ، إلخ) التي يثبطها الدواء الخاص بك ، فما الذي ترغب في قياسه؟ MTT يقيس قابلية الخلية للبقاء وهو أمر مفيد من حيث تحديد LD50

لاختيار خلية مقاومة للأدوية ، قد لا يكون هناك بروتوكول قياسي لأن الخلايا المختلفة تتفاعل بشكل مختلف مع دواء معين ، فإن أفكارك تسير في الاتجاه الصحيح

علاوة على ذلك ، فإن سلالة الخلايا المقاومة للأدوية ليست بالضرورة خالدة

كنت أحاول تحديد تركيز الدواء المطلوب لتثبيط نمو الخلايا بنسبة 50٪ ، وهو IC50. ومع ذلك ، فأنا لست متأكدًا من كيفية تحديد ذلك من خلال النظر إلى قيم الامتصاصية. كيف أعرف التركيز الذي أدى بالفعل إلى انخفاض نمو الخلايا بنسبة 50٪؟ كيف تتوافق قيم الامتصاصية بالضبط مع النسبة المئوية للنمو ، هل توجد معادلة لذلك يمكن حسابها؟

نمو الخلايا بمعنى انقسام الخلية؟ لذلك ، يمكنك تحديد إيقاف دورة الخلية (G0 / G1 أو G2) الذي يحدث اعتمادًا على العقار الذي تستخدمه مع MTT ، ولا يمكنك التمييز بين توقف دورة الخلية من ناحية ، ومن ناحية أخرى ، توقف الدورة غير الخلوية ولكن زيادة موت الخلايا المبرمج أو النخر لديك لاستخدام اختبارات مختلفة (FACS و MTT و SRB ومقايسات موت الخلايا المبرمج والنخر)

في الواقع ، يجب تحديد هدف الدواء

نمو الخلايا بمعنى انقسام الخلية؟ لذلك ، يمكنك تحديد إيقاف دورة الخلية (G0 / G1 أو G2) الذي يحدث اعتمادًا على العقار الذي تستخدمه مع MTT ، ولا يمكنك التمييز بين إيقاف دورة الخلية من ناحية ، ومن ناحية أخرى ، توقف الدورة غير الخلوية ولكن زيادة موت الخلايا المبرمج أو النخر لديك لاستخدام اختبارات مختلفة (FACS و MTT و SRB ومقايسات موت الخلايا المبرمج والنخر)

في الواقع ، يجب تحديد هدف الدواء

هذا يبدو أكثر تعقيدًا. اعتقدت أن هناك طريقة لتحديد IC50 من MTT. ربما تكون نقطة المنتصف بين امتصاص التحكم الإيجابي (الخلايا التي لا تحتوي على علاج دوائي) والسيطرة السلبية (الامتصاص بالوسائط وحدها). وينبغي أن تعطيني الامتصاصية عند نصف نقطة تركيز الدواء عند IC50؟

نمو الخلايا بمعنى انقسام الخلية؟ لذلك ، يمكنك تحديد إيقاف دورة الخلية (G0 / G1 أو G2) الذي يحدث اعتمادًا على العقار الذي تستخدمه مع MTT ، ولا يمكنك التمييز بين إيقاف دورة الخلية من ناحية ، ومن ناحية أخرى ، توقف الدورة غير الخلوية ولكن زيادة موت الخلايا المبرمج أو النخر لديك لاستخدام اختبارات مختلفة (FACS و MTT و SRB ومقايسات موت الخلايا المبرمج والنخر)

في الواقع ، يجب تحديد هدف الدواء

هذا يبدو أكثر تعقيدًا. اعتقدت أن هناك طريقة لتحديد IC50 من MTT. ربما تكون نقطة المنتصف بين امتصاص التحكم الإيجابي (الخلايا بدون علاج دوائي) والسيطرة السلبية (الامتصاص بالوسائط وحدها). وينبغي أن تعطيني الامتصاصية عند نصف نقطة تركيز الدواء عند IC50؟

نعم ، صحيح تقنيًا ، لكن IC50 المُحدد باستخدام MTT يقول فقط أنه في حالة معينة من عقارك في ظل ظروف محددة ، يعيش 50 ٪ من خليتك ، سيكون هناك سؤال حول كيفية تفسير هذه النتيجة ، وما هي أسبابها ، وبالتالي ، أنت بحاجة إلى طرق إضافية كما اقترحت

لبدء اختبار MTT فلا بأس

أوافق على ذلك ، أردت فقط التأكد من اختبار MTT أولاً عند تحديد تركيز الأدوية التي تعيش بنسبة 50٪ وكيفية استقراء هذا التركيز بالرسوم البيانية. شكرا على اقتراحاتكم & # 33


ماذا تمثل قيم X و Y؟

في علم العقاقير ، تحدد تجربة الاستجابة للجرعة آثار الدواء على الخلايا المزروعة في المختبر. على سبيل المثال ، تدرس تجربة الاستجابة للجرعة مدى نجاح الدواء في تقليل نمو الأورام المزروعة في زراعة الخلايا.

يتكون هذا التحليل من رسم قيم X التي تمثل تركيزات الدواء أو وظيفة التركيزات (تركيز اللوغاريتمات) مقابل قيم Y التي تمثل الاستجابة. والنتيجة هي منحنى سيني (منحنى الاستجابة للجرعة) مع الهضاب السفلية والعلوية (انظر أدناه). وتجدر الإشارة إلى أن هذه الاستجابات المقاسة هي قياسات نقطة النهاية. بمعنى آخر ، يتم قياس الاستجابة بعد معالجة النظام البيولوجي بتركيزات مختلفة من الدواء. لا يتم قياس الاستجابة في أوقات مختلفة بعد معالجة النظام البيولوجي بتركيز دواء واحد.

قيم-X

قيم X هي تركيزات (جرعات) من عقار مستخدم في التجربة. في علم الأدوية ، تشمل أربع فئات مختلفة من الأدوية المستخدمة في تجارب الاستجابة للجرعة ما يلي:

ناهض & ndash يسبب استجابة تحفيزية (تزيد الاستجابة مع زيادة تركيز الدواء) أو مثبطة (تقل الاستجابة مع زيادة تركيز الدواء). ناهض كامل يسبب أقصى استجابة.

ناهض جزئي & ndash ينتج استجابة ولكن لا يمكنه الحصول على أقصى استجابة.

الناهض المعكوس & ndash ينتج استجابة معاكسة لذلك من ناهض. يقلل من الاستجابة القاعدية الموجودة مسبقًا (الاستجابة التي تظهر في غياب أي دواء).

المناهض & ndash يثبط عمل ناهض.

قيم ص

قيم Y هي الاستجابة المقاسة على فترات. يمكن أن تنخفض الاستجابة مع زيادة الدواء (منحنى السيني الهابط) أو يمكن أن تزيد الاستجابة مع زيادة الدواء (المنحنى السيني الصاعد) ، انظر أدناه.

في تحليل الاستجابة للجرعة ، يُفترض أن القيم Y تتبع توزيع Gaussian أو & ldquonormal & rdquo عند أي تركيز معين (قيمة X). إذا كنت ستقوم برسم التوزيع الاحتمالي للنقاط المتغيرة (Y) عند أي قيمة X ، فإن المنحنى سيشبه منحنى على شكل جرس. ستكون ذروة الجرس هي الحدث الأكثر احتمالا. هذا مفهوم إحصائي ويجب عدم الخلط بينه وبين المنحنى السيني الناتج عن التحليل.

يمكن تحويل قيم Y إلى وحدات مختلفة عن طريق الضرب أو القسمة على ثابت. على سبيل المثال ، في الفحص ، يمكنك قياس التألق ولكنك ترغب في رسم وحدات التركيز. تتيح لك معرفة العلاقة بين مقدار التألق المتولد وتركيز الهدف في العينة تحويل قيم استجابة التألق المقاسة إلى قيم التركيز المقابلة ببساطة عن طريق القسمة على ثابت.

يمكن أيضًا تحويل الاستجابة من خلال التطبيع. على سبيل المثال ، يمكن تغيير الاستجابة إلى النسبة المئوية - مع تحويل الإشارة القصوى إلى استجابة & quot100 & quot ، وتم تحويل الحد الأدنى للإشارة إلى استجابة & quot0 & quot- مما يسمح بمقارنة التجارب المختلفة. نناقش التحول والتطبيع لاحقًا.

عدد ونطاق وتباعد التراكيز

يؤدي النظر في عدد ومدى التباعد بين التركيزات إلى تفسير أفضل لتأثير الدواء.

عدد قيم X - يوصى عادةً برسم 5-10 تركيزات موزعة جيدًا عبر نطاق واسع يسمح بالقياسات لتوليد الهضبة السفلية والهضبة العلوية والجزء المركزي من المنحنى (2). كلما زادت القيم ، زادت جودة التحليل.

المدى - يعد تطبيق الوظيفة اللوغاريتمية على التركيزات قبل التحليل مفيدًا عندما تزيد التركيزات بشكل كبير ، مثل 1 ، 10 ، 100 ، 1000. يسمح بتصور أفضل لشكل المنحنى عن طريق تقليل تشتت البيانات.

يسهل أخذ اللوغاريتم التحليل من خلال توزيع نقاط البيانات بالتساوي.


تحديد قيم IC50 و IC90 للمستخلصات الإيثانولية لبعض النباتات الطبية ضد المثقبية البروسية البروسية

الاقتباس: بولوس تي ، أحمد أب ، أبوي تي ، وآخرون. تحديد IC50 وجيم90 قيم المستخلصات الإيثانولية لبعض النباتات الطبية ضد المثقبية البروسية البروسية. قوس كلين ميكروبيول. 2016 ، 7: 3.

حقوق النشر: & نسخ 2016 ، Bulus T ، وآخرون. هذا مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب شروط ترخيص Creative Commons Attribution License ، والذي يسمح بالاستخدام غير المقيد والتوزيع والاستنساخ بأي وسيلة ، بشرط ذكر المؤلف الأصلي والمصدر.

الملخص

خلفية: الزراعة في المختبر للأنواع اللعابية المثقبيات يتطلب استخدام حاضنة ثاني أكسيد الكربون ، وهي معدات باهظة الثمن تعتمد فقط على إمدادات ثابتة من الكهرباء. تم العثور على نظام استزراع بسيط يستخدم فيه مجفف زجاجي بالغاز بثاني أكسيد الكربون المحضر في المختبر (5CG-Desiccator) للحفاظ على نمو المثقبيات بشكل فعال في المختبر ، ولذلك أوصي باستخدام هذه التقنية في المختبر. مضاد التريبانوزوما فحص المركبات والمستخلصات النباتية. تشير هذه الورقة إلى محاولة لتقييم فائدة هذا النظام لتحديد قيم IC50 و IC90 للمستخلصات الإيثانولية من بعض النباتات الطبية ضد المثقبية البروسية البروسية باستخدام Diminazine Aceturate (DA) كمبيد تريبانوسيد قياسي.
نتائج الطرق: الطفيليات تمت زراعته في وسط Eagle & rsquos في وجود تركيزات متفاوتة من كل مستخلص نباتي في صفيحة عيار دقيق 96 بئر باستخدام طريقة 5CGDesiccator. تم استقراء قيم IC50 و IC90 من مقاربتين رسوميتين. أظهر التحليل المقارن لقيم IC90 أن المستخلصات من أربعة نباتات (Cymbopogon spp و Moringa oleifera و Vernonia amygdalina و Allium sativum) تحتوي على قيم IC90 أقل من 200 جم / مل وخمسة (Azadirachta indica و Khaya senegalensis و Carica papaya و Eucalyptus spp و Aloe vera ) كانت قيمته بين 200 جم / مل و 1000 جم / مل وواحد (Mitracarpus scaber) كانت قيمته أكبر من 1000 جم / مل.
استنتاج: النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام نهجين مختلفين سمحت بإجراء تقييم مقارن لإمكانيات المثقبيات في المستخلصات. تمت مناقشة اقتراحات حول الطرق العملية لتحسين هذه التقنية لتحديد IC50 لقيم المركبات / الأجزاء الاصطناعية والمشتقة من النباتات.

الكلمات الدالة

5CG- مجفف IC50 وجيم90 تحديد المستخلصات النباتية المثقبية بروسي بروسي

مقدمة

العديد من أنواع المثقبيات هي العوامل المسببة لداء المثقبيات الأفريقي ، وهو مرض مسؤول عن موت ومرض الإنسان وحيواناته الأليفة في أفريقيا الاستوائية. وفقًا لمنظمة الصحة العالمية [1] ، يتأثر ما يقرب من 300000 إلى 500000 شخص بداء المثقبيات الأفريقي البشري (HAT) مع خسائر اقتصادية سنوية تقدر بنحو 4.5 مليار دولار متراكمة بسبب داء المثقبيات الحيواني. لا يوجد لقاح فعال حتى الآن ، ضد أي نوع من أنواع المثقبيات الأفريقية ، في التداول التجاري [2] وتواجه مبيدات المثقبيات المستخدمة العديد من التحديات بما في ذلك ارتفاع تكلفة الشراء ، والآثار الجانبية السامة المرتبطة بالتناول وتزايد حدوث مقاومة للأدوية المطورة بواسطة أنواع مختلفة من الطفيلي [3].

في محاولة للحصول على عوامل متاحة بسهولة وأمان أكثر ، يتم فحص المركبات الاصطناعية والمشتقة من النباتات المختلفة لمعرفة إمكاناتها المضادة للمثقبيات [3-6]. في المختبر تتطلب إجراءات فحص المواد ضد المثقبيات تربية الطفيل بشكل محوري. يوجد اليوم العديد من تقنيات الاستزراع طويل المدى لاستزراع أنواع مختلفة من المثقبيات والتي تم تكييفها واستخدامها في العديد من المعامل البحثية [4-9]. تتضمن الممارسة استنبات الكائنات الحية تحت 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون2 التركيز في أول أكسيد الكربون2 الحاضنة ، وهي معدات باهظة الثمن وغير متوفرة بسهولة في معظم المعامل في البلدان النامية في العالم. بالإضافة إلى ذلك ، تعتمد المعدات على إمدادات ثابتة من الكهرباء والتي عادة ما تكون مشكلة للباحثين في مثل هذه البلدان. نتيجة لهذا التحدي ، عمل العلماء في البلدان النامية في المختبر وقت الزراعة لمدة قصيرة تصل إلى ساعة أثناء فحص المقتطفات بحثًا عن إمكاناتها المضادة للجراثيم [5،10،11]. على الرغم من تسجيل قدر من النجاح ، إلا أن المعدات كانت محدودة باستخدام انخفاض فقط في حركة الطفيل كمؤشر لوفيات الطفيليات. على الرغم من أن الحركة قد تعكس قابلية الطفيلي للحياة ، إلا أنه في بعض الأحيان ، يمكن للكائنات الحية غير المتحركة الاحتفاظ بالعدوى ، وفي مثل هذه الحالة ، يمكن أن تؤدي الحركة إلى تضليل في المختبر النتائج ، وبالتالي التشكيك في موثوقية البيانات المتولدة. مرة أخرى ، نظرًا لعدم إعطاء وقت كافٍ للتفاعل بين الطفيليات والمستخلصات ، كان من المستحيل ، من خلال هذا النهج تحديد IC50 أو IC90 قيم المستخلصات النباتية وبالتالي تمنع أي دراسة مقارنة لمبادئ مضادات الطفيليات التي تم فحصها. كشفت مراجعة الأدبيات أن الدراسات حول النباتات الطبية الأفريقية ضد المثقبيات قليلة [12].

الجهود الأخيرة لمصدر نظام استزراع بديل متكيف ميدانيًا مع ثاني أكسيد الكربون2- حاضنة تستخدم مجفف زجاجي بالغاز مع ثاني أكسيد الكربون المحضر في المختبر2 [13]. سوف تستكشف هذه الدراسة إمكانية استخدام مجفف 5CG للتقييم الدقيق في المختبر لإمكانات مثقبيات المستخلصات الإيثانولية من Cymbopogon spp و M. oleifera و V. amygdalina و A. sativum، والنباتات الطبية الأصلية في شمال نيجيريا ضد المثقبيات بروسي بروسي.

المواد والأساليب

جمع النباتات وتحديدها

عينات الأوراق الطازجة لعشرة نباتات (اليوم ساتيفوم (كما)، الصبار (AV) ، أزاديراشتا إنديكا (منظمة العفو الدولية) ، كاريكا بابايا (CP) ، Cymbopogon spp (CS) ، شجرة الكينا spp (ES) ، Khaya senegalensis ، المورينجا أوليفيرا (MO) ، جرب ميتراكاربوس (MS) و فيرنونيا أميجدالينا) تم جمعها داخل مدينة كادونا ونقلها إلى قسم العلوم البيولوجية ، وجامعة ولاية كادونا ، وكادونا نيجيريا للتعرف عليها.

حيوانات تجريبية

تم استخدام الجرذان والفئران التي تمت تربيتها في مستعمرة الحيوانات في قسم الكيمياء الحيوية ، جامعة ولاية كادونا ، نيجيريا ، لصيانة الطفيليات وكمصدر للطفيليات لتجارب الاستزراع في المختبر. تم الاحتفاظ بجميع الحيوانات وفقًا للمعايير المقبولة.

الطفيلي T. ب. بروسي، تم الحصول عليها من المعهد النيجيري لأبحاث داء المثقبيات (NITR) ، كادونا وتم الحفاظ عليها من خلال المرور المتسلسل في الفئران والجرذان.

المواد الكيميائية / الكواشف

تم شراء ثنائي إيثيل أمين إيثيل السليلوز (DE52) وقاعدة Tris من Sigma Chem. شركة (الولايات المتحدة الأمريكية). أحماض أمينية ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم (NaH2ص4.2H2O) ، فوسفات هيدروجين ثنائي الصوديوم (Na2HPO412 ح2O) ، الجلوكوز ، المضادات الحيوية (الأمبيسلين ، الستربتومايسين) ، حمض الإيثيلين ديامين تتراسيتيك (EDTA) ، الكلوروفورم ، الجلسرين ، مسحوق جيمسا ، كربونات الكالسيوم (كاليفورنيا)2كو3) كانت جميعها من الدرجة التحليلية.

تحضير المستخلصات النباتية

تم جمع الجزء الورقي من كل نبتة طازجة ومقطعة إلى قطع باستخدام سكين معقمة. تم نقل 100 جم بالضبط من النبات المفروم إلى الخلاط ، وأضيف 250 مل من الإيثانول قبل الخلط. تم نقل المادة النباتية المخلوطة إلى قنينة زجاجية نظيفة سعة 500 مل والسماح لها بالاستخلاص بالنقع لمدة 12 ساعة. بعد ذلك ، تم ترشيحه بقطعة قماش الجبن ثم مع طبقات مزدوجة من ورق ترشيح Whatman. تم جمع ناتج الترشيح وتركيزه باستخدام مبخر دوار. تم نقل التركيز إلى بوتقة نظيفة وموزنة ووضعها في حمام مائي عند 45 درجة مئوية حتى يتم إزالة المذيب المتبقي بالكامل. ثم تم تخزين المستخلص المجفف في الثلاجة عند 4 درجة مئوية لحين الحاجة.

تحضير مصل الماعز

تم جمع عينة دم طازجة من ماعز صغير يبدو سليمًا في أنابيب معقمة 10 مل للطرد المركزي وطردها عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. تم تنشيط المصل بالحرارة عند 55 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة وتخزينه في قسامات من 10 مل في 10 مل من أنابيب الطرد المركزي عند -20 درجة مئوية.

دستور الثقافة المتوسطة ل في المختبر دراسات

تم تحضير وسط الاستزراع ، وسط النسر الأساسي الأدنى ، يدويًا باستخدام التركيبة المحددة بواسطة النسر [14]. تم تحضير الأحماض الأمينية والفيتامينات والأملاح غير العضوية وأحمر الفينول والمضادات الحيوية المفلترة من الوسط بشكل منفصل وتخزينها في قسامات من 1 مل عند -20 درجة مئوية. قبل التجارب ، تم أخذ قسامات وإعادة تكوينها بالتركيزات المطلوبة لوسط Eagle & rsquos. تمت إضافة مصل الماعز (المحضر من دم تم جمعه حديثًا) والجلوكوز إلى الوسط لتحقيق تركيز 20٪ و 1٪ على التوالي كما هو موصوف سابقًا [15].

في الجسم الحي نمو وعزل T. ب. بروسي من الحيوانات المصابة

في مرحلة التطفل في الدم ، تم التضحية بالجرذان المصابة (التي يتراوح وزنها بين 100-150 جم) بعد تخدير الكلوروفورم ومن خلال ثقب القلب ، تم جمع الدم في محاقن تحتوي على 1 ٪ (وزن / حجم) من محلول EDTA في محلول ملحي فوسفات 100 ملي مولار (0.2 مل من محلول ملحي من الفوسفات). EDTA: 2 مل من الدم). تم تجميع الدم الذي تم جمعه في 10 مل من أنابيب الطرد المركزي ، مركزة (3000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق) وتم انتقاء الطفيليات التي تتراكم طبقة مصفرة بيضاء غائمة بعناية باستخدام ماصة البسترة في أنبوب معقم يحتوي على جلوكوز فوسفات ملحي (100 ملي PSG ، درجة الحموضة 7.2. ، 0.2٪ (وزن / حجم) الجلوكوز) ثم تم تحريرها لاحقًا من جميع ملوثات كريات الدم الحمراء وخلايا الدم البيضاء عن طريق المرور عبر العمود الكروماتوغرافي للتبادل الأيوني كما وصفه لانهام وغودفري [16]. باختصار ، تمت إذابة مصفوفة السليلوز DE52 في محلول ملحي فوسفات الجلوكوز وتم تحميلها على عمود حقنة سعة 20 مل تم حظر مخرجه بقليل من الصوف القطني. تم تطبيق طفيليات الطبقة المصقولة على العمود الذي تمت معايرته مسبقًا باستخدام محلول ملحي للفوسفات (درجة الحموضة 8.0). من خلال هذا الإجراء ، تم ربط الخلايا الحمراء المتبقية بالمصفوفة بينما تجري الطفيليات أسفل العمود كمعلق أبيض سميك. يتم غسل العمود باستمرار حتى يصبح eluent شفافًا مرة أخرى. تم بعد ذلك طرد المعلق عند 2500 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، وتم التخلص من المادة الطافية وغسل حبيبات الطفيليات ثلاث مرات باستخدام PBS (الرقم الهيدروجيني 7.2) قبل إعادة تعليقها أخيرًا في وسط الزراعة وتحديد كثافة الطفيل باستخدام مقياس الكريات.

عد الطفيل في المستنبت والمعلق

تم تحديد كثافة الطفيليات في وسط الاستزراع باستخدام غرفة عد Neubauer المحسنة الجديدة [13] الموصوفة سابقًا [15].

في المختبر دراسات التقييم الجزئي

تم تحضير محاليل مستخلص المخزون بإذابة 1 مجم من كل مستخلص نباتي مع 1 مل من وسط الاستزراع المحتوي على 1٪ D- جلوكوز ، مخزنة بـ 25 ملي مولار Hepes إلى الرقم الهيدروجيني 7.4 ومكملتها بمصل الماعز المعطل بالحرارة بنسبة 20٪. تم توزيع مائة ميكرو لتر من وسط مستخلص المخزون والتخفيفات المختلفة الناتجة منه في ثلاث نسخ في آبار تحتوي على 96 بئراً صفيحة عيار دقيقة تنتج مجموعة من التركيزات من 1000 جم / مل إلى 7.8 جم / مل. تمت إضافة 20 لترًا من المعلق الطفيلي لكل بئر (يحتوي على ما يقرب من 10000 طفيلي وينتج كثافة طفيلي 8 مرات × 10 4 طفيلي / مل) ثم تم تغطية الصفيحة ووضعها في مجفف زجاجي وغاز ثاني أكسيد الكربون (بكمية) أي ما يعادل 5٪ من سعة المجفف) على الفور في المجفف بتركيز 5٪ (من حيث تم اشتقاق اختصار 5 CG). تم وصف تفاصيل تحضير ثاني أكسيد الكربون في مكان آخر [15]. كانت التركيزات الفعالة الناتجة من 995 إلى 6.5 جم / مل. لتحديد مدى نشاط المستخلصات ، تم تحضين الطفيل في لوحة اللتر الصغير عند 27 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في وجود المستخلصات وتم تحديد كثافة الطفيل في نهاية فترة الحضانة باستخدام مقياس الدم ومقارنتها بالكثافات التي تم الحصول عليها من السالب. السيطرة (طفيلي مستزرع في 100 لتر من الوسط بدون مستخلص أو دواء معياري) ومراقبة الأدوية المعيارية (طفيلي مستزرع في 100 لتر من 1000 جم / مل من خلات ديمينازين) آبار. لكل مستخلص أو عقار ، فإن التركيز الذي يثبط تعداد الطفيليات بنسبة 50٪ (IC50) و 90٪ (IC90) تم تحديدها بواسطة طريقة الاستيفاء الخاصة بـ Hills كما أوضحها Huber and Koella [17] واستخدمها Scory and Steverding [9].

نتائج

يعني IC50 وجيم90 تم تحديد قيم جميع المقتطفات باستخدام طريقتين بيانيتين منفصلتين. في النهج الأول ، تم رسم عدد الطفيليات (٪) على Yaxis مباشرة مقابل تركيز المستخلص على المحور X (شكل 1). من هذا الرسم البياني ، كان من الصعب استقراء IC50 قيم تركيز أقل من 50 مجم / مل بسبب تجمع المنحنيات حول هذه المنطقة. IC90 ومع ذلك ، لم يشكل تحديد القيم أي تحدٍ لأن استخدام المعلمة اللوغاريتمية على المحور السيني أدى إلى ظهور مخططات متباعدة جيدًا (الشكل 2) حول الأجزاء المؤدية إلى IC50/ IC90.

شكل 1: العلاقة بين بقاء الطفيل على قيد الحياة واستخلاص تركيز ثلاثة نباتات ممثلة و Diminazine Aceturate (مركب معياري).


Torrey Pines Scientific EchoTherm IC50 Digital ، تبريد إلكتروني / تسخين حمام جاف ، -10 درجة مئوية إلى 110 درجة مئوية

قم بتبريد وتسخين العينات البيولوجية من -10.0 درجة مئوية إلى 110.0 درجة مئوية (بدون كتلة العينة). تحكم في لوحة التسخين باستخدام مستشعر درجة الحرارة الداخلية ، أو تحكم في كتلة العينة أو المحلول الموجود في الوعاء مباشرة باستخدام مسبار درجة الحرارة المقدم. تمتع بالتحكم الدقيق في العينة ، حتى في درجة الحرارة المحيطة ، في مختبرك أو في الميدان على حمام تجفيف إلكتروني صغير الحجم ومتعدد الاستخدامات وغير مكلف للتبريد / التدفئة.

يتميز حمام EchoTherm ™ IC50 الرقمي الإلكتروني ذو الحالة الصلبة تمامًا بالتبريد / التسخين بالحمام الجاف مدمجًا ومتعدد الاستخدامات وموثوقًا به وسهل الاستخدام. ما عليك سوى استخدام السهمين لأعلى أو لأسفل على مفتاح غشاء اللوحة الأمامية لضبط درجة الحرارة المرغوبة وستنتقل الوحدة إلى درجة الحرارة هذه.

سطح التبريد / التسخين عبارة عن لوح ألومنيوم مقاس 2.875 بوصة (7.3 سم) × 4.375 بوصة (11.1 سم) وهو مسطح جدًا للحصول على اتصال مثالي مع عينتك. عند التفريغ ، سيصل سطح اللوحة إلى أقل من 0 درجة مئوية في أقل من دقيقتين. سوف تسخن أيضًا إلى 37 درجة مئوية في حوالي دقيقتين. قد يختلف معدل التبريد أو التسخين هذا باختلاف الحمل على اللوحة. على سبيل المثال ، يمكن الوصول إلى درجات حرارة أقل من 4.0 درجة مئوية على قالب صلب من الألومنيوم بحجم 4 بوصة (10.2 سم) × 3 بوصة (7.6 سم) × 6 بوصة (15.2 سم) في أقل من ساعة واحدة. عند عزلها ، يمكن دفع هذه الكتل الكبيرة إلى أقل من 0 درجة مئوية. ستكون تدرجات درجة الحرارة من المركز إلى حافة أي كتلة ألمنيوم مذكورة أقل من 0.3 درجة مئوية في أي درجة حرارة.

يتوفر غطاء عينة لألواح الفحص أو كتل الألومنيوم والعينات الأخرى. هذه الكتل والأغطية متوفرة كملحقات.


ملخص

في الجدول 1 ، نحاول إجراء مقارنة بين تطورات التخفيف التسلسلي والمباشر التي تمت مراجعتها أعلاه.

كما أنه يعمل على إبراز كيف يمكن لنهج التخفيف المباشر أن تقلل أو تقلل من أوجه القصور المتصورة لتقنيات تحليل الاستجابة للجرعة الحالية. من المعروف جيدًا أنه حتى المشكلات البسيطة في معالجة السائل أو تقنية الخلط ستؤثر على نسبة التخفيف ومن ثم تركيز المركب ، وستتضاعف هذه الأخطاء أثناء عملية التخفيف التسلسلي التي تزداد مع كل تخفيف ونقل متتاليين.

ومع ذلك ، فمن غير المدرك أن المركبات الكارهة للماء قد تُفقد بسهولة من المحلول أثناء التخفيف المتسلسل المائي مع امتصاص ما يصل إلى 90-99٪ من المادة إلى الأسطح الوسيطة بما في ذلك أطراف الماصة التي يمكن التخلص منها وآبار التخفيف. يزيل التخفيف المباشر باستخدام ADE الامتصاص المركب والالتصاق (الالتصاق) لأن العينة لا تواجه أطراف الماصة.

من غير المعروف إلى أي مدى يمكن أن تلتصق المركبات الكارهة للماء بالأسطح الداخلية لممرات ذات طرف ثابت أو فوهات موزعات نانوليتر ، والتي قد يكون لبعضها طلاء سطحي خاص غير لاصق. إذا تم استخدام النصائح التي يمكن التخلص منها مرة واحدة فقط ، فلا توجد فرصة للتلوث المتبادل ، على الرغم من أن الاستخدام المتكرر قد يزيد من فرصة الترحيل.

نظرًا لأن الماصات ذات الأطراف الثابتة أو فوهات موزعات النانو ليتر تتلامس مع العديد من المركبات المختلفة في مناسبات متعددة ، حتى مع الغسيل الأكثر صرامة ، فهناك احتمال للتلوث المتبادل. لتقليل المرحل إلى مستوى مقبول ، من المعتاد غسل الرؤوس أو الفوهات الثابتة بشكل أكثر شمولاً أو بشكل متكرر ، ونتيجة لذلك سيكون تيار النفايات السائلة المتولد مرتفعًا. إذا تم استخدام النصائح التي يمكن التخلص منها مرة واحدة فقط ، دون غسل ، فإن تدفق النفايات البلاستيكية يزيد أيضًا.

من خلال اعتماد إستراتيجية تخفيف مباشرة ، يلزم تقليل مادة المصدر بشكل كبير ومذيب أقل لعمل تركيزات العينة من التقنيات التقليدية التي تستخدم التخفيفات التسلسلية. بشكل عام ، قد تبدو حالة التفكير في التخفيف المباشر بديهية ، خاصة إذا كان من الممكن تحسين جودة النتائج وكشف فعاليتها الحقيقية باستخدام ADE. ومع ذلك ، يبقى أن نرى ما هي القيمة التي ستضعها المجموعات المسؤولة عن إجراء مقارنات الاستجابة للجرعة على هذه الفوائد وما إذا كان سيتم اعتماد التخفيف المباشر بشكل أكبر ، لا سيما إذا كان ذلك ينطوي على شراء معالج سائل ADE جديد. DDW

ظهرت هذه المقالة في الأصل في DDW Spring 2007 Issue

الدكتور جون كوملي هو العضو المنتدب لشركة HTStec Limited ، وهي شركة استشارية مستقلة لأبحاث السوق ينصب تركيزها على مساعدة العملاء في تقديم تقنيات جديدة لمنصة التمكين (معالجة السوائل ، وأتمتة المختبرات ، وأدوات الكشف وتقنيات الكاشفات) لاكتشاف الأدوية. منذ تأسيسها في عام 2003 ، قامت HTStec بنشر 23 تقرير سوق حول تقنيات اكتشاف الأدوية ، وقام الدكتور كوملي بتأليف 17 مقالة مراجعة في Drug Discovery World. يمكن الحصول على مزيد من المعلومات حول الوصول إلى تقرير السوق "اتجاهات التوزيع الآلي ذات الحجم المنخفض 2006" من خلال زيارة www.htstec.com أو بإرسال بريد إلكتروني إلى [email protected] للحصول على نسخة مجانية من الملخص التنفيذي للتقرير وجدول المحتويات.

1 اتجاهات الاستغناء الآلية ذات الحجم المنخفض 2006 ، 44pp ، التي نشرتها HTStec Limited ، كامبريدج ، المملكة المتحدة ، يونيو 2006.

2 سبايسر ، جي وآخرون. التقييم الدوائي للتخفيف المركب المختلف ونماذج التحويل على مقايسة إنزيم في تنسيق حجم بئر 384 منخفض الحجم. اجتماع تكنولوجيا اكتشاف الأدوية ، بوسطن ، أغسطس 2005.


احسب التخفيف المطلوب لتحضير محلول المخزون. تعتمد حاسبة تخفيف Selleck على المعادلة التالية:

تركيز (بداية) x الحجم (بداية) = التركيز (أخير) x الحجم (أخير)

عادة ما يتم اختصار هذه المعادلة على النحو التالي: C1V1 = C2V2 ( مدخل انتاج | )

* عند إعداد حلول المخزون ، استخدم دائمًا الوزن الجزيئي الخاص بالدفعة للمنتج الموجود على ملصق القارورة و MSDS / COA (متاح عبر الإنترنت).


يُظهر بروتين RecQ4 تجانسًا لكل من بروتين تكرار الحمض النووي

يُظهر بروتين RecQ4 تماثلًا لكل من بروتين تكرار الحمض النووي Sld2 و هيليكازات RecQ المتعلقة بإصلاح الحمض النووي. في NER ، حيث يظهر البروتين توطين نووي سريع ولكن عابر بعد العلاج بالأشعة فوق البنفسجية. لا تتم ملاحظة إعادة التوطين بعد معالجة الإيتوبوسيد أو H2O2 ، مما يشير إلى أن مشاركة DmRecQ4 في الإصلاح من المحتمل أن تصبح مسارًا خاصًا. يشير تقييم إزالة DmRecQ4 إلى أن موقع SLD2 كان مهمًا ، ولكنه لم يكن مناسبًا حقًا ، لوظيفة الازدواجية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تؤدي إزالة DmRecQ4 N-terminal إلى إعادة توطين العلاج بالأشعة فوق البنفسجية Benzoylaconitine IC50 بشكل فعال ، مع التوصية بإدراج محددات هذه الاستجابة في الطرف C للبروتينات. أخيرًا ، تُظهر العديد من عمليات الحذف الإنقاذ التفاضلي للـ dsRNA المتولد عن أنماط تكاثر وتكرار. ستصبح هذه مفيدة للتقييم الجزيئي لجزء معين من DmRecQ4 في مسارات متحركة مختلفة. أعراض مقدمة روثموند سي تومسون وأعراض بالير جيرولد وأعراض راباديلينو هي ثلاثة اضطرابات وراثية متنحية تتميز بمجموعة متباينة من الأعراض بما في ذلك المسام وتدهور الجلد وقصور النمو والتشوهات الهيكلية والتعرض الشديد لساركوما العظام. على الرغم من أن النظام الدقيق الذي يتم من خلاله إنتاج هذه الأعراض يمكن أن يكون غير مؤكد ، إلا أن بروتينات RecQ4 التي تم اكتشافها والتي كانت Benzoylaconitine IC50 والتي لوحظ أنها تحورت في نسبة عالية من الحالات يمكن أن تكون بروتينات RecQ4 [1] ، [2]. يمكن تصنيف RecQ4 كمكون من أفراد عائلة RecQ Benzoylaconitine IC50 من الهليكازات [3]. بالإضافة إلى ذلك ، تعرض منطقة المنفذ تماثلًا ضعيفًا لبروتينات المبيضات SLD2 [4] & # 8211 بروتينات مركزية في التحكم في بدء تكرار الحمض النووي. أدت هذه العروض إلى التوصية بأن هذه البروتينات لها وظائف مزدوجة في تكرار وإصلاح الحمض النووي ، وقد قدمت الدراسات الحديثة أدلة تجريبية لدعم ذلك. لدعم دور النسخ المتماثل لـ RecQ4 ، تُظهر مقتطفات Xenopus التي تفتقر إلى RecQ4 انخفاضًا في دمج BrdU [4] C [5] ، وتظهر خلايا الثدييات المستنفدة عيوبًا في الانتشار [4]. يتم تقديم المزيد من الأدلة عادةً من خلال المحادثة المادية والوظيفية لـ RecQ4 مع بروتينات النسخ. في مقتطفات Xenopus يبدو أن RecQ4 يتفاعل مباشرة مع Cut5 ولكن ليس Mcm2-7 Rabbit Polyclonal إلى LFA3 أو Cdc45 [4] C [5]. يتم تحميله على الكروماتين في نفس المرحلة من دورة الخلية مثل Cut5 ، ويحتاج تحميله إلى تطوير preRC. بالإضافة إلى ذلك ، يتسبب استنفاد RecQ4 في انخفاض إطلاق DNA و RPA polymerase Leader على الكروماتين ، ولكنه لا يؤثر على إطلاق Mcm2-7 أو Cdc45 أو Cut5 أو pol epsilon أو GINS. Mammalian RecQ4 will not really interact with Cut5 evidently, but will present connections with Mcm2-7, Mcm10, Cdc45, and GINS [6]C[7]. Reduction of RecQ4 causes reduced presenting of GINS, although the presenting of Mcm7, CDC6 and Mcm10 are not affected. It has been reported Benzoylaconitine IC50 to fill at the lamin t origins [6] also. Mouse knockouts which get in the way with the RecQ like helicase area are practical [8], but a interruption near the SLD2 homology area is certainly fatal [9]. These data recommend a duplication function for RecQ4 obviously, but disparity in the reported proteins connections complicates decryption of the specific duplication function of RecQ4. In support of a fix function for RecQ4, genomic instability is certainly noticed in both affected individual mouse and cells kinds [10]. In addition Hydroxyurea (HU), camptothecin (CPT), doxyrubicin (DOX), cis-platin (CDDP) UV, ionizing light (IR) and hydrogen peroxide (L2O2 awareness of individual cells provides been reported in some research eg [11]C[12] [2] (although mistakes with awareness are noticed between different research/cell lines eg [13]). Even more particular research from different labs possess recommended that RecQ4 may function in three different fix paths: A function in NER is certainly recommended by the remark that after UV harm the proteins is certainly noticed to join to chromatin foci and interact with XPA [14]. If RecQ4 is certainly not present the damage is usually reported to remain unrepaired: Etoposide treatment also causes increased focal chromatin binding and an conversation with Rad51, suggesting a role in dsb repair [15]: Finally BER induced by H2O2 treatment causes co localization with APE1 and FEN1 [16], and in vitro RecQ4 stimulates APE1 nuclease activity. The exact mechanism by which RecQ4 functions in any of these repair pathways remains to be decided. Unlike most other eukaryotes which have five RecQ4 helicases Drosophila has only three BLM, RecQ4 and RecQ5. It is usually therefore possible that DmRecQ4 may have additional functions compensating for the lack of WRN and RecQ1. In fact a comparison of protein sequences suggests that DmRecQ4 has a 382aa region (aa228-610) that is usually not present in RecQ4 protein from other species. Previous studies in whole lures have got suggested replication and repair involvement for DmRecQ4 again. A duplication function is normally backed by the remark that in targeted gene knockouts larval minds present reduced Benzoylaconitine IC50 growth and BrdU incorporation, with.


What's a Good Significance Level?

Statistically significant results are required for many practical cases of experimentation in various branches of research. The choice of the statistical significance level is influenced by a number of parameters and depends on the experiment in question.

In most cases, the data follows a normal distribution, which is thankfully also the simplest case. With standard normal distribution, you can use a threshold level of 0.05 confidently. However, care should always be taken to account for other distributions within the given population.

Although 5%, 1% and 0.1% are common significance levels, it is not clear cut which level to use in an actual study - it depends on the norms of the field, previous studies, and the amount of evidence needed. However, it is not recommended to have a significance level higher than 5% because it too often leads to type 1-errors.


STEP FIVE: The math is important too!

All that starts well has to end well your experiment becomes a success only after you learn to process and present your data in a precise manner. The following steps are rationally designed in order to get accurate cell viability values post-treatment with a drug/inhibitor. The efficacy of the drug/inhibitor is seen in terms of its IC50 value. The lower the value, more potent it is.

Calculations involved:

  • Subtract the absorbance of the blank wells from all the wells.
  • Divide the absorbance of the wells which have the cells treated with the drug/inhibitor by the average of the absorbances emitted from the cells in the control wells. This gives you the ratio of the number of dead cell to the number of living cells.
  • Multiply the ratio by 100 to give you the viability in %.

Graphing:

Use the cell viability values to graph the data. I like to use Graphpad Prism 6 because it has built-in dose response functions.

After entering the software you can use one of the in-built functions of the software that is Dose response where the x- axis is log (dosage).


شاهد الفيديو: Si: الكيمياء الطبية: IC50 (سبتمبر 2022).


تعليقات:

  1. Courtenay

    إنها عبارة رائعة وقيمة إلى حد ما

  2. Waldon

    آسف للتدخل ... لدي موقف مماثل. أدعوك إلى مناقشة.

  3. Maccallum

    أعتقد أنك مخطئ. دعونا نناقش هذا.

  4. Fenyang

    برافو ، فكرة رائعة

  5. Gwalchmai

    لافت للنظر! مدهش!

  6. Ritchie

    لم تحاول البحث عن Google.com؟

  7. Avery

    أعتذر ، لكن هذا ليس ما أحتاجه تمامًا.



اكتب رسالة